糸状菌の形態形成においてキチン合成酵素群が果たしている機能の解析

几丁质合酶基团在丝状真菌形态发生中的作用分析

基本信息

批准号：
08660091
负责人：
堀内裕之
金额：
$ 1.34万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08660091/
关键词：
糸状菌キチン合成酵素 Aspergillus 先端生長

项目摘要

本研究は子嚢菌類の糸状菌Aspergillus nidulansにおいて当研究室で単離された4つのキチン合成酵素遺伝子chsA、chsB、chsC、chsDの菌糸生長、分化における機能分担を解析する目的で行われたものである。これらのキチン合成酵素遺伝子の内、単独遺伝子破壊ではその破壊株において表現形に変化が見られなかったchsA、chsCの二重遺伝子破壊株を作製しその分生子形成効率を測定したところ、野菜株の0.1%以下にまで低下していた。さらにこの破壊株の生育は高濃度の塩、浸透圧安定化剤、SDS、キチン結合色素、キチン合成酵素阻害剤に感受性を示し、菌糸の形成においてもこれらの遺伝子産物が機能を持つことが推定された。さらにこれらの二重破壊株の分生子柄、分生子の構造を光学顕微鏡下で観察したところ、分生子の形成効率が野生株の10%程度にまで低下するchsa、chsD二重遺伝子破壊株においては正常な形の分生子柄と分生子が観察されたが、chsA、chsC二重遺伝子破壊株においては分生子柄の構造に異常が見られた。これらのことからchsA、chsC遺伝子産物は菌糸生長、分生子柄の形態形成、分生子形成において重複した機能を持つことが推定された。一方、chsA、chsB、chsC、chsDの各遺伝子のORFにEscherichia coli由来のlacZ遺伝子を融合淡白の型で繋いだキメラ遺伝子をA.nidulans内に導入し、in situ染色法によりその発現部位を検討したところchsAは細胞内での発現量が少なく主に分生子柄で発現していたのに対し、chsB、chsC、chsDは菌糸、分生子柄とも発現が見られたが特に分生子柄での発現が強かった。これらの結果は、chsA、chsB、chsC、chsD遺伝子産物ともに分生子(柄)形成に機能を持つこと、またchsB遺伝子産物が単独で菌糸生長に重要な機能を持つという推定を支持する結果となった。また、A.nidulansの染色体よりAspergillus fumigatusのchsE PCR断片のホモログを取得したところ新規のキチン合成酵素をコードすることが明らかとなった。

这项研究是在太平洋细菌的曲霉菌Nidulans中进行的，以分析四个几丁质合成酶CHSA，CHSB，CHSB，CHSC，CHSD的功能，该酶在该实验室中分离出来，以分析差异化的功能。在这些几丁质合成酶基因中，CHSA，CHSC双基因破坏了菌株，它们在独立基因的破坏中没有改变，并测量了原始分子形成效率。此外，这种破坏性菌株的生长显示出对高浓度盐，渗透压稳定剂，SDS，几丁质结合色素和甲壳质合成酶抑制剂的敏感性，并且估计这些基因产物在Mycelium的形成中具有功能完成了。此外，当观察这些双重毁灭的份额的结构和光学显微镜下癫痫发作下的癫痫发作的结构时，CHSA，CHSD双基因破坏库存，以正常形式的野生菌株观察到约10％。裸露的儿童模式和癫痫发作，但是在CHSA和CHSC双基因破坏库存中，异常在癫痫发作模式的结构中是异常的。从这些事实来看，据估计，CHSA和CHSC基因产物在形成正与形成，癫痫发作模式的形成和形成方面具有重复的功能。另一方面，CHSA，CHSB，CHSC和CHSD的基因是在A.Nidulans中引入的，A.Nidulans是一种将源自大肠杆菌的LACZ基因与浅白色类型相关的嵌合体基因，并通过原位染色方法来检查其表达同一时间，CHSA在细胞中的表达很小，主要以指定的原始图案表达，而CHSB，CHSC和CHSD也用于Hyphagus和指定的原始模式，但尤其是在指定的原始图案中强的。这些结果支持具有CHSA，CHSB，CHSC和CHSD基因产物的诱人（模式）形成功能的估计，并且CHSB基因产物对结型和长度具有重要的功能。同样，从a.nidulans的染色体中，当新的几丁质合成酶为代码时，清除了烟曲霉CHSE PCR片段的同源物。