PCR増幅パターンに変化のある牛ウイルス性下痢粘膜病ウイルスの遺伝子解析

PCR扩增模式变化的牛病毒性腹泻粘膜病病毒遗传分析

• 批准号: 07760307
• 负责人: 田島 誉士
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07760307/
• 关键词: 牛ウイルス性下痢粘膜病; BVD-MD; PCR; 変異遺伝子

近年、牛ウイルス性下痢粘膜病(BVD-MD)ウイルスのgp25をコードする遺伝子が正常より約300bp大きく、gp48をコードする遺伝子が正常より約300bp小さいウイルス遺伝子が、PCR検査により野外発症牛から検出された。このPCR増幅パターンに変化のあったBVD-MDウイルス(変異ウイルス)も、既報のウイルス株と同様の発症機序を有していることが接種試験において確認されたことを平成6年度本研究(課題番号06760287)において示した。そこで今回、この変異ウイルスの遺伝子変異様式を追究するために種々検討した。まず、変異ウイルスおよびBVD-MDウイルスの標準株であるNADL株のPCR増幅遺伝子を制限酵素BspEIで処理した。この酵素の認識部位はgp48遺伝子中に1ヵ所存在するので、NADL株のgp48PCR増幅遺伝子は2本に切断された。しかし、変異ウイルスのgp25およびgp48領域のPCR増幅遺伝子はどちらもBspEIにより消化されなかった。また、NADL株のそれぞれのPCR増幅遺伝子内の任意の25〜30塩基を認識するプローブを用いサザンブロット解析を行ったところ、変異ウイルスのPCR増幅遺伝子はどちらもこれらのプローブと反応しなかった。したがって変異ウイルスのPCR増幅パターンの変化は、gp25およびgp48遺伝子相互の置換ではない可能性が示唆された。次に、本研究で使用しているPCR用プライマーについて他のウイルス株に関する報告およびコンピューター解析に基づき検討したところ、gp48遺伝子を増幅するプライマーはp20およびp14領域を認識していることが判明した。p14遺伝子はウイルス遺伝子内で再配列を生じやすい遺伝子であるとの報告がある。したがって本研究で対象とした変異ウイルスでも再配列が生じ、そのためまったく別の領域が増幅されている可能性も考えられた。現在この変異遺伝子のシークエンス解析を実施中であり、まもなくその本態が明らかになる。

近年来，编码牛肉病毒性腹泻粘膜疾病（BVD-MD）病毒的GP25的基因比正常情况大约300 bp，并且编码GP48的基因大约要小于正常。 BVD-MD病毒（突变病毒）已在这种PCR扩增模式中发生了变化，在疫苗接种测试中已证实，它具有与先前报道的病毒菌株相同的发作机制。 。因此，这次，我们进行了各种检查，以追求该突变病毒的遗传突变样式。首先，用受限的酶BSPEI处理了NADL库存的PCR扩增基因，即突变病毒和BVD-MD病毒的标准应变。由于该酶在GP48基因中有一个公认的位点，因此将NADL库存GP48PCR扩增基因切成两个。但是，在可变病毒的GP25和GP48区域中，BSPEI都没有消化PCR扩增基因。此外，当使用探针进行南部印迹分析时，该探针识别NADL菌株的PCR扩增基因中的任何25至30个碱基时，突变病毒的PCR扩增基因均不反应这些探针。因此，建议突变病毒的PCR扩增模式的变化可能不是GP25和GP48基因互连。接下来，根据其他病毒菌株的报告和计算机分析对本研究中使用的PCR底漆进行了检查，发现放大GP48基因的底漆识别P20和P14区域。据报道，p14基因是一种倾向于引起病毒基因赎回的基因。因此，在本研究中针对的突变病毒中产生了救赎，该病毒可能具有完全不同的区域。目前，正在实施该突变基因的序列分析，并且当前状态很快将被揭示。