タンパク質の核・細胞質間輸送機構の遺伝学的解析

蛋白质核质转运机制的遗传分析

• 批准号: 07780627
• 负责人: 木俣 行雄
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Nara Institute of Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07780627/
• 关键词: 核; タンパク質輸送; 核膜孔; GFP; NUP133; ヌクレオポーリン

核蛋白質の核への移行に障害ある酵母(S.cerevisiae)変異株の取得と解析を目的として研究を進め、以下の結果を得た。A)蛋白質の核への移行の可視化を目的とし、クラゲ由来の緑色蛍光蛋白質(GFP)cDNAとアフリカツメガエル由来の核蛋白質nucleoplasmin cDNAを融合させて酵母細胞内で発現させ、以下の知見を得た。1)GFPと融合させてもnucleoplasminは核に移行し、その移行は緑色の蛍光により可視化された。2)酵母の培養温度が上昇するにつれ、GFPの発する蛍光強度は著しく低下した。この原因は、GFPの蛍光体形成が高温ではうまくなされないためだと考えられた。B)nucleoplasminを発現する温度感受性変異株500種を対象とし、増殖制限温度で培養したときのnucleoplasminの局在を蛍光抗体染色法により調べた。その結果、核蛋白質の核への移行に障害があると考えられる酵母変異株が3種選択された。その中の1種は、nucleoporinの1種であるNUP133遺伝子の変異株であった。

我们进行了研究，以获得并分析了核蛋白向细胞核易位缺陷的酵母（酿酒酵母）突变菌株，并获得了以下结果。 A) 为了可视化蛋白质进入细胞核的易位，我们融合了来自水母的绿色荧光蛋白（GFP）cDNA和来自非洲爪蟾的核蛋白核纤蛋白cDNA，并在酵母细胞中表达，得到了以下结果调查结果。 1) 即使与 GFP 融合，核蓝蛋白也会易位到细胞核，并且易位通过绿色荧光可视化。 2）随着酵母培养温度的升高，GFP发出的荧光强度明显下降。其原因被认为是 GFP 的磷光体形成在高温下不能正常发生。 B)当在生长限制温度下培养500个表达核蓝蛋白的温度敏感突变株时，使用荧光抗体染色研究核蓝蛋白的定位。结果，选择了三种酵母突变体，它们被认为在核蛋白易位到细胞核方面存在缺陷。其中之一是 NUP133 基因的突变株，NUP133 基因是一种核孔蛋白。

项目成果

Lim Chun Ren et al: "Thermosensitivity of Gveen Fluovescent Protein Fluorescence Vtilized to Reveal Novel Nuclear-like Compar tuent in a mutant Nucleoporin NSP" Journal of Biochemistry. 118. 13-17 (1995)

Lim Chun Ren 等人：“利用 Gveen 荧光蛋白荧光的热敏性揭示突变核孔蛋白 NSP 中的新型核样比较”《生物化学杂志》。