ラット肝培養伊東細胞のヒアルロン酸合成に及ぼすエタノールとその代謝産物の影響

乙醇及其代谢物对培养大鼠肝Ito细胞透明质酸合成的影响

• 批准号: 06770407
• 负责人: 浦島 左千夫
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Kanazawa Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770407/
• 关键词: アルコール性肝障害; ヒアルロン酸; 伊東細胞

アルコール(AL)性肝障害では、血中ヒアルロン酸(HY)値が高値を示す例が少なくないが、その機序として類洞内皮細胞でのHYの分解能の低下、ないしはFat storing cell(FSC)によるHYの合成亢進の可能性が考えられる。そこで、正常および慢性AL投与ラット肝より分離・培養したFSCのHY合成能について検討することとした。1.FSCの分離・培養・正常および慢性AL投与Wistar系雄性ラットからTsutsumiらの方法に従ってFSCを分離・培養した。すなわち、ラット肝をプロナーゼとコラゲナーゼで潅流後、メトリザマイドを用いた比重遠心法により、FSCを分離・採取し、Dulbecco's MEMを用い、37℃、5%炭酸ガス下で培養した。なお、培養FSCの同定はデスミン染色によって確認した。伊東細胞は培養開始3日目より細胞数が増加し始め、9日目以降は定常状態を示した。2.HY濃度の測定:HY結合蛋白(HABP)を用いたSandwich Binding Protein Assay(SBPA)法により測定した。すなわち、ポリスチレンビーズ上に固相化したHABPと回収した培養液とを反応させた後、ビオチン化HABPを加え、さらにペルオキシダーゼ標識化アビジンを結合させ、o-phenylene-diamineを加えて発色後、492nmにおける吸光度を測定し、標準曲線からHY濃度を測定した。なお、FCS加Dulbecco's MEMに含まれているHY濃度を測定し、検体の濃度を補正した。3.正常ラット肝由来培養FSCにおけるHY合成能:FSCの増殖にともなうHYの経時的推移についてみると、培養3日目 254±54mg/dl、5日目 846±43mg/dl、9日目 1026±86mg/dおよび、12日目 1580±120mg/dlであった。これらの結果から、SABP法によるHYの測定は培養3日目から可能であり、またFSCの増殖とともに、HY産生の増加することが明らかとなった。4.慢性AL投与ラット肝由来培養FSCにおけるHY合成能:培養3と5日目のHY濃度は、287±78mg/dl、912±122mg/dlであり、いずれも対応する正常ラットのHY濃度より高い傾向を示し、培養9日目では1500mg/dl以上、培養120日目では2000mg/dl以上で、正常ラットより明らかに高い値であった。これらの実験結果から、慢性AL投与が培養FSCのHY合成能を促進することが推定された。

在酒精（AL）肝损伤中，在许多情况下，血液透明质酸（HY）水平很高，但是这种机制可能是正弦内皮细胞的HY分辨率降低，或者是脂肪储存细胞（FSC）的HY合成的增加。因此，我们决定研究FSC在与正常和慢性al-Adminested大鼠肝脏分离和培养后合成Hy的能力。 1。FSC遵循Tsutsumi等人的方法，将FSC从正常和慢性的Al-Adminded Wistar雄性大鼠中分离出来。也就是说，将大鼠肝脏灌注于戊二酶和胶原酶，并使用metrizamide分离并通过特定的重力离心进行FSC，并使用Dulbecco的MEM在5％二氧化碳下的37°C下培养。培养的FSC的鉴定通过Desmin染色证实。从培养开始的第三天，ITO细胞的细胞数量开始增加，并且从第9天开始处于稳定状态。 2。浓度的测量：使用hy结合蛋白（HABP）通过三明治结合蛋白测定（SBPA）方法测量。也就是说，在将聚苯乙烯珠的固化HABP与回收的培养基反应后，添加了生物素化的HABP，并进一步结合了过氧化物酶标记的Avidin，添加了o-苯基二胺以开发颜色，并测量了492 Nm的吸收性，并根据HY浓度测量了在492 NM处的吸收性。此外，测量了FCS添加的Dulbecco MEM中包含的HY浓度，并校正了样品的浓度。 3。在正常大鼠肝脏培养的FSC中的HY合成能力：随着FSC的增长，观察HY随时间的变化，第3天，第5天的846±43mg/dl在第5天，第9天，第9天，第9天和1580±120mg/d的日期。文化的生产随着FSC的增长而增加。 4。在慢性AL治疗大鼠中大鼠肝脏培养的FSC中的合成能力：培养3和5的HY浓度为287±78mg/dl和912±122mg/dl，两者显示出比相应的正常大鼠更高的hy浓度，其浓度高于相应的正常大鼠，并且在1500mg/dl的培养物上均高于1500mg/dl Or的培养物。培养的第120天，显然高于正常大鼠。这些实验结果表明，慢性施用促进了在培养的FSC中合成HY的能力。