PCR法を用いたDNA塩基配列比較によるキンウワバ類の類猿関係解析法の開発

开发通过PCR法比较DNA碱基序列来分析棘科类人猿与单形关系的方法

基本信息

批准号：
06760046
负责人：
野村昌史
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

遺伝子本体であるDNAのうち、ある特定の遺伝子をコードしている部分をPCR(ポリメラーゼ連鎖反応)法を用いて増幅させ、この部位の塩基配列を読みとり種間での比較からキンウワバの類猿関係を明らかにすることを目的とした。まず研究上の基礎的な条件設定を決定することとし、成虫の脚1本を用いてProteinase KによりDNAの抽出を行った。抽出したDNAに遺伝子をコードしている部分のプライマーを反応させて増幅を行うこととなるが、当初予定したDNAのデータベースを利用する方法は利用するのにあたり設備等が必要であったため、研究討議なども参考にしてこれまでに公表されている論文から増幅させる部位を決定した。その結果ミトコンドリアDNA上にコードされている遺伝子の方が、DNAの抽出条件にあまり左右されず安定して遺伝し部位の増幅が行えるようであったため、チトクロームオキシダーゼII(COII)を選定し、蛾で報告されているこの遺伝子の両端部分のプライマーを合成し、増幅を試みた。その結果、一般に行われているPCRの温度および試薬条件でCOIIと思われる断片長(約600塩基対)の増幅がアガロース電気泳動により確認されたが、安定して増幅されなかったため反応時の試薬などの条件の検討を行った。これによりほぼ安定した増幅が行えるようになったが、使用したプライマーに非特異的な部位の増幅に由来する断片が現れ、この存在により塩基配列の比較を行うことはできなかった。今後は目的とするCOII-DNA断片のみを増幅させる条件と検討と、増幅後速やかに塩基配列を行うことができる質の良い断片を得る条件の検討を行う予定である。

这样做的目的是扩大DNA的部分，即使用PCR（聚合酶链反应）编码特定基因的基因的主体，读取该位点的基础序列，并通过比较物种之间的比较来阐明猴子猴子猴子的猴子关系。首先，确定了研究的基本条件，并使用一条成年腿使用蛋白酶K提取DNA。通过对基因编码部分的引物进行反应，对提取的DNA进行扩增，但是使用最初计划的DNA数据库所需的设备使用的方法，因此我们决定在该站点上从先前发表的论文中进行放大，包括研究讨论。结果，看来在线粒体DNA上编码的基因更稳定地遗传了，并且可以放大位点而不会受到DNA的提取条件的显着影响，因此选择了细胞色素氧化酶II（COII），并且在该基因的两端中都选择了细胞氧化酶II（COII）。结果，被认为在通常执行的PCR温度下被认为是COII的片段长度的扩增和试剂条件通过琼脂糖电泳证实，但是放大并不稳定放大，因此检查了反应过程中的试剂等条件。这允许几乎稳定的扩增，但是从非特异性位点的扩增中得出的片段出现在所使用的引物中，因此由于存在，因此无法比较基本序列。将来，我们计划研究仅放大目标COII-DNA片段的条件和条件，以及获得高质量片段的条件，该条件允许在扩增后快速执行基本序列。