無尾両生類の下垂体神経葉ホルモン受容体遺伝子の解析

无尾两栖类垂体神经小叶激素受体基因分析

基本信息

批准号：
06740618
负责人：
兵藤晋
金额：
$ 0.58万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

前年度までの研究から、下垂体神経葉ホルモンのバソトシン(VT)が、無尾両生類の体液浸透圧および体液量の調節に重要であること、また個体発生の過程においては、変態にともなう陸上への進出に重要な役割を果たすことが示唆されてきた。本研究では、無尾両生類におけるVTの役割を明らかにするため、VT受容体の発現の変動を調べることを目的として、VT受容体cDNAのクローニングを行った。まず、哺乳類のデーターをもとに、RT-PCR法により部分的なクローンを得ることを試みた。ウシガエルとヒキガエルの腎臓および膀胱からmRNAを抽出し・精製し、cDNAを合成した。神経葉ホルモン受容体は、膜7回貫通型の受容体ファミリーに属する。その構造において、膜貫通部分やホルモン結合部位と予想される部分は、神経葉ホルモン受容体ファミリーの間で比較的保存性が高いと考えられる。そこで、これらの領域に対するdegenerateプライマーを作成し、PCRに用いた。RT-PCRを行った結果、ウシガエルとヒキガエルの両方で、水・電解質代謝の調節に関わると考えられるV-2型受容体cDNAクローンが得られた。ヒキガエルでは、もう一つの神経葉ホルモンであるメソトシンの受容体cDNAクローンも得られた。現在、cDNAライブラリーを作成し、全長の解析を行っている。ノーザン解析を行ったところ、V-2型受容体は、膀胱や腎臓といった浸透圧調節器官で特異的に発現していることがわかつた。一方、哺乳類において血圧などの調節に関わるV-1型受容体cDNAのクローン化も、肝臓のmRNAを用いて試みているが、まだ成功していない。哺乳類以外でV-2型受容体遺伝子のクローン化に成功したのは、本研究が始めてである。今後は、得られたcDNAクローンを用い、ホルモン遺伝子の発現とともに受容体遺伝子の発現の変動を解析していく。

去年进行的研究表明，垂体神经叶激素催产素（VT）对于调节无尾目两栖动物的体液渗透压和体液容量很重要，并且在发育过程中发挥着重要作用。在本研究中，我们克隆了VT受体cDNA，以研究VT受体表达的变化，以阐明VT在无尾两栖动物中的作用。首先，我们尝试根据哺乳动物数据通过 RT-PCR 获得部分克隆。从牛蛙和蟾蜍的肾脏和膀胱中提取并纯化mRNA，并合成cDNA。神经小叶激素受体属于七次跨膜受体家族。在其结构中，跨膜部分和预测的激素结合位点被认为在神经小叶激素受体家族中相对保守。因此，我们为这些区域创建了简并引物并将其用于 PCR。 RT-PCR结果显示，在牛蛙和蟾蜍中均获得了V-2型受体cDNA克隆，该受体被认为参与水和电解质代谢的调节。在蟾蜍中，还获得了另一种神经叶激素——中产素的受体 cDNA 克隆。我们目前正在创建 cDNA 文库并进行全长分析。 Northern 分析表明，V-2 受体在膀胱和肾脏等渗透调节器官中特异性表达。与此同时，人们尝试利用肝脏mRNA克隆参与哺乳动物血压调节的V-1受体cDNA，但尚未成功。这项研究首次在哺乳动物以外的物种中成功克隆了V-2受体基因。今后，我们将利用获得的cDNA克隆来分析激素基因表达以及受体基因表达的变化。