ポルフィロモナス・ジンジバリスの赤血球凝集機構に関する研究

牙龈卟啉单胞菌血凝机制研究

• 批准号: 06771666
• 负责人: 大和 香奈子
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06771666/
• 关键词: ポルフィロモナス・ジンジバリス; 赤血球凝集因子; インスリンB鎖

P.gingivalisの赤血球凝集活性(HA活性)をコールターカウンターを用いることで定量化し、その経時的変化を調べた。HA活性の経時的変化は、0.8%に調整した赤血球に4〜32μg/mlの濃度で赤血球凝集因子(HA)を加え0.5〜4.0時間反応させて調べた。得られた値は加えた赤血球の粒子数と比較して%表示で示した。またジチオスレイトール(DTT)存在下でも実験を行った。HAを、加えた赤血球は初期には凝集するがその後徐々に解離した。最大凝集に達する時間は赤血球やHAのロットなどにより変動するが、その最大凝集量はHAの濃度に依存した。また、DTT存在下では最大凝集量は増加し、最大凝集に達する時間、解離する時間共に短縮することが確認された。またアルギニン、シトルリン、リジン、グリシン、ヒスチジンなどのアミノ酸存在下でHA(15μg/ml)と赤血球(0.9%)の反応の経時的変化を測定したところ、各種アミノ酸の中で特にアルギニンはHA活性に複雑な影響を与えることがわかった。そのためさらにアルギニンの濃度をふって調べたところ低濃度の場合は、初期の段階では活性が賦活されるものの短時間で凝集の解離が始まりやがて阻害に転じる。逆にアルギニンが高濃度の場合は活性は常に阻害された。このような二相性の変化はアルギニン以外では認められなかった。HA活性を阻害するといわれているアルギニンを含むペプチド(インスリンB鎖)の阻害反応は、インスリンB鎖(0,12.5,25,50,100μM)とプレインキュベートしたHA(20μg/ml)を赤血球と反応させて調べると、濃度依存的にHA活性を阻害した。また20μg/mlのHAを、0.2%から1.6%までの赤血球と反応させると血球濃度1.0%付近で凝集量がプラトーに達した。同濃度のHAに100μMインスリンB鎖を加えても最大凝集量に変化は見られなかった。阻害剤の有無にかかわらず最大凝集量に変化は認められないことから、この阻害は競合的なものであると考えられた。コールターカウンターを使った以上のような実験によって凝集発現には複雑な機構が存在していることがわかった。今後さらに各因子の性質を調べる必要があると思われる。

使用库尔特计数器对牙龈卟啉单胞菌的血凝活性（HA活性）进行定量，并研究其随时间的变化。通过将浓度为4至32μg/ml的血凝因子(HA)添加到调节至0.8%的红细胞中并反应0.5至4.0小时来研究HA活性随时间的变化。获得的值表示为与添加的红细胞颗粒数相比的百分比。实验还在二硫苏糖醇（DTT）存在下进行。添加HA的红细胞最初聚集，但随后逐渐解离。尽管达到最大凝集的时间根据红细胞和HA的数量而变化，但最大凝集的量取决于HA的浓度。还证实，在DTT存在下，最大聚集量增加，并且达到最大聚集的时间和解离时间均缩短。此外，我们还测量了在精氨酸、瓜氨酸、赖氨酸、甘氨酸和组氨酸等氨基酸存在下，HA (15 μg/ml) 和红细胞 (0.9%) 之间的反应随时间的变化。影响是复杂的。因此，我们进一步检测了精氨酸的浓度，发现在低浓度下，活性在初始阶段被激活，但聚集体在短时间内开始解聚，最终发生抑制。相反，当精氨酸以高浓度存在时，活性总是受到抑制。对于精氨酸以外的物质，没有观察到这种双相变化。据说可以抑制HA活性的含精氨酸肽（胰岛素B链）的抑制反应是通过预先孵育的HA（20μg/ml）与胰岛素B链（0、12.5、25、50、100μM）反应来进行的。 ）与红细胞进行检查时，HA 活性以浓度依赖性方式受到抑制。此外，当20μg/ml HA与0.2%至1.6%红细胞反应时，凝集量在血细胞浓度约为1.0%时达到稳定水平。即使在相同浓度的HA中添加100μM胰岛素B链，最大聚集量也没有变化。由于无论抑制剂存在与否，最大聚集量均未观察到变化，因此认为这种抑制是竞争性的。上述使用库尔特计数器的实验揭示了聚集表达中存在复杂的机制。未来似乎有必要进一步研究各个因素的性质。