ヒト不妊精巣におけるカルモデュリンの免疫組織化学的研究

人不育睾丸中钙调蛋白的免疫组织化学研究

基本信息

批准号：
06771260
负责人：
辻克和
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06771260/
关键词：
calmodulin immunohistochemistry human testis male infertility maturation arrest

项目摘要

[対象]特発性男性不妊症患者55名から採取した精巣生検組織を用いた。精巣の組織型はhypospermatogenesis26例、maturation arrest11例(complete spermatocyte arrest3例、incomplete spermatocyte arrest5例、spermatid arrest3例)、Sertoli cell-only syndrome18例であった。[免疫染色]標本は採取後直ちにブアン液で固定した。ウシ脳カルモデュリンより作成した抗体を用いて間接プルオキシダーゼ法を行った。[染色性の定量]各組織型の染色性を定量化するためランダムに選んだ一定面積内のすべての1次精母細胞数及び強陽性に染色された1次精母細胞数(=パキテン後期の正常な1次精母細胞数)をそれぞれ算定しその比率を求めこれをcalmodulin-specific staining index(CaM-S index)とした。コントロールとして正常精巣5例についてもindexを求めた。[結果及び考察]1、不妊症患者の精巣における抗カルモデュリン抗体に対する個々の造精細胞の染色性は組織型に関わらず正常精巣における染色性と同じであった。すなわち陽性反応は1次精母細胞のパキテン期の細胞で初めて観察されパキテン初期では陰性〜疑陽性、パキテン中期になると陽性となり、パキテン後期では強陽性を呈した。二次精母細胞や円形の精子細胞も強陽性であったが、長形の精子細胞〜精子になると染色性は低下し陰性となった。セルトリ細胞は陰性〜陽性を呈しライディヒ細胞は陰性であった。2、Complete spermatocyte arrestの症例におけるCaM-S indexは8.9±3.1%であった。これはコントロール(31.6±3.4.7%)、hypospermatogenesis(27.1±7.1%)、incomplete spermatocyte arrest(29.9±4.4%)の症例のindexと比較して有意に低かった。この理由としてcomplete spermatocyte arrestの症例では、核の濃縮が起こりカルモデュリンの反応が陰性となった変性したパキテン後期の1次精母細胞が増加し、正常のパキテン後期の細胞が減少したためと考えられた。3、抗カルモデュリン抗体による精巣の免疫染色はHE染色で区別の付けにくいパキテン初期、中期、後期の細胞の同定に有用である。

[对象] 采用55例特发性男性不育症患者的睾丸活检组织。睾丸组织学表现为生精不足26例，成熟停滞11例（精母细胞完全停滞3例，精母细胞不完全停滞5例，精子细胞停滞3例），纯支持细胞综合征18例。 [免疫染色] 标本采集后立即用Bouin's溶液固定。使用从牛脑钙调蛋白制备的抗体进行间接氧化酶原法。 [染色性的量化] 为了量化每种组织类型的染色性，计算了随机选择的固定区域内的初级精母细胞的数量和强阳性染色的初级精母细胞的数量（=粗线期晚期正常初级精母细胞的数量），测定其比值，作为钙调蛋白特异性染色指数（CaM-S指数）。并以5例正常睾丸作为对照，测定该指数。 [结果与讨论] 1.不育患者睾丸中单个生精细胞抗钙调蛋白抗体的染色特性与正常睾丸相同，无论组织学类型如何。即粗线期在初级精母细胞中首先观察到阳性反应，粗线期早期为阴性至假阳性，粗线期中期为阳性，粗线期晚期为强阳性。次级精母细胞和圆形精子细胞也呈强阳性，但当涉及细长精子细胞和精子时，染色性下降并变为阴性。支持细胞呈阴性转阳性，间质细胞呈阴性。 2.精母细胞完全停滞病例的CaM-S指数为8.9±3.1%。这显着低于对照组（31.6±3.4.7%）、生精不足（27.1±7.1%）和精母细胞不完全停滞（29.9±4.4%）病例的指数。其原因被认为是在精母细胞完全停滞的情况下，具有核固缩和阴性钙调蛋白反应的退化粗线期初级精母细胞增加，而正常粗线期晚期细胞减少。 3.抗钙调蛋白抗体对睾丸进行免疫染色，可有效识别HE染色难以区分的早、中、晚粗线期细胞。