ヒト血管内皮細胞、平滑筋細胞のCa^<2+>動態およびPGI_2産生に及ぼすMgの影響

Mg对人血管内皮细胞和平滑肌细胞Ca^2+动力学和PGI_2产生的影响

• 批准号: 05770455
• 负责人: 清水 寛正
• 金额: $ 0.45万
• 依托单位: 福井医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 1994
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770455/
• 关键词: 血管内皮細胞; 血管平滑筋細胞; マグネシウム; 細胞内カルシウム; プロスタサイクリン

1、ヒト臍帯動脈から得られた培養血管内皮細胞(HUVEC)、ラット大動脈から単離、培養した血管平滑筋細胞(SMC)を用いて、低Mg液、正Mg液、高Mg液の各Mg濃度条件のHepes buffer(MgSO_4;0・1・2mM)中に産出されるPGI_2量を、その最終安定産物である6-keto-PGF1alphaをRIA法にて測定することにより定量化した。PGI_2産出量は、保生液のMg濃度を変化させるだけでは変化はみられなかった。しかし、HUVECにPGI_2産生刺激因子であるアラキドン酸20muMを添加すると高Mg時には、正Mg時に比べ、60%の産生増加が認められた。またSMCにアラキドン酸20muM、ノルアドレナリン10^<-6>Mを添加すると、高Mg時には正Mg時に比べ各々100%、30%の産生増加が認められた。2、上記各Mg濃度条件下でのSMC細胞内Ca^<2+>濃度を、細胞内蛍光色素であるFura-2を用いて分光光度計にて測定した。SMC内Ca^<2+>濃度は、低Mg液、正Mg液、高Mg液中ではそれぞれ280nM・136nM・84nMzで、Mg欠乏状態では細胞内Ca^<2+>濃度が増加することが示された。またSMCにアンギオテンシンIIを10^<-7>Mを添加すると、高Mg液中では正Mg液中に比べ細胞内Ca^<2+>濃度の一過性上昇度合いは50%に抑制された。細胞外Mg濃度は血管平滑筋細胞の細胞内Ca^<2+>濃度に影響を及ぼしており、また刺激物質によるCa^<2+>上昇にも影響し、さらに生理活性物質産生能にも影響することが明らかになった。このことから細胞外Mg濃度は血管のトーヌスの調節に密接に関与している可能性が、培養細胞レベルでも示された。

1.使用从人脐动脉获得的培养血管内皮细胞(HUVEC)和从大鼠主动脉分离培养的血管平滑肌细胞(SMC)，使用低Mg溶液、阳性Mg溶液和高Mg溶液的各Mg溶液。浓度条件通过 RIA 方法测量其最终稳定产物 6-keto-PGF1α，对缓冲液 (MgSO_4; 0, 1, 2 mM) 中产生的 PGI_2 量进行定量。仅仅改变保存液中的Mg浓度并不会改变PGI_2的产生量。然而，当将20μM花生四烯酸（一种PGI_2产生刺激剂）添加到HUVEC中时，与Mg正常时相比，当Mg高时，产量增加了60%。此外，当将20μM花生四烯酸和10^-6M去甲肾上腺素添加到SMC中时，与Mg正常时相比，当Mg高时，产量分别增加100％和30％。 2.使用分光光度计，使用细胞内荧光染料Fura-2测量在上述每种Mg浓度条件下的SMC细胞内Ca 2+ 浓度。 SMC中细胞内Ca^2+浓度在低Mg溶液、正Mg溶液和高Mg溶液中分别为280nM、136nM和84nMz，且细胞内Ca^2+浓度在Mg中增加显示不足状态。此外，当向SMC中添加10 ^ -7 M血管紧张素II时，与阳性Mg溶液相比，在高Mg溶液中细胞内Ca 2+ 浓度的短暂增加程度被抑制至50％。细胞外的Mg浓度影响血管平滑肌细胞的细胞内Ca^2+浓度，也影响兴奋剂引起的Ca^2+增加，也影响产生生理活性物质的能力。明确表示有影响。这表明细胞外镁浓度可能与血管紧张度的调节密切相关，即使在培养细胞水平上也是如此。