びまん性肺疾患におけるサーファクタント・プロテイン-A(SP-A)に関する研究

表面活性蛋白-A（SP-A）在弥漫性肺疾病中的研究

基本信息

批准号：
05770392
负责人：
諏訪部章
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Yamagata University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770392/
关键词：
びまん性肺疾患サーファクタント SP-A 肺胞II型上皮細胞

项目摘要

サーファクタント・プロテイン-A(SP-A)は、サーファクタント特異蛋白の一つであり、脂質の気層液層界面への吸着促進、II型肺胞上皮細胞を介する脂質の取り込み促進および分泌抑制、血清由来サーファクタント阻害因子の不活化、肺胞マクロファージの貧食促進、など多彩な機能を営んでいる。しかし、正常ヒト肺からのSP-Aの分離はこれまで報告がなく、また成人呼吸窮迫症候群や特発性肺線維症など難治性肺疾患におけるSP-Aの動態および機能に関する情報は乏しい。今回我々は、これまで繁雑であったSP-A精製の簡易化を試み、微量臨床検体からSP-Aを分離精製しその動態および機能の追及を目的とした。今年度前半は、基礎的検討として、まずラット肺洗浄液からサーファクタントを精製しSP-A分離を試みた。その結果、精製サーファクタントをEGTAで処理しカルシウムをキレートするとSP-Aがサーファクタント脂質より遊離した。このことから、SP-Aがカルシウム依存性にサーファクタント脂質に結合することが判明し、この性質がSP-A精製に応用可能であることを証明した。その成果は裏面の如く論文掲載予定である(J.Jpn.Med.Soc.Biol.Interface.,1994,In press).今年度後半はこのシステムを臨床検体に応用すべく実験を進めてきた。臨床検体としては各種肺疾患患者の気管支鏡検査時の気管支肺胞洗浄液または剖検者の肺洗浄液を用い、現在までこれら洗浄液から数回の超遠心を繰り返すことによりサーファクタントを精製してきた。現在、前半の基礎的データをもとにカルシウムキレート法によりSP-A精製を行っている。またその構造的特徴および機能をSDS電気泳動やゲル炉過法による蛋白分析およびラットII型肺胞上皮細胞を介するサーファクタント脂質の分泌抑制能によりそれぞれ検討し論文掲載予定である。

表面活性蛋白-A（SP-A）是一种表面活性剂特异性蛋白质，可促进脂质向气液界面的吸附，通过II型肺泡上皮细胞促进脂质摄取并抑制分泌，并抑制血清分泌。功能，包括灭活衍生的表面活性剂抑制因子和促进肺泡巨噬细胞的吞噬作用。然而，迄今为止，尚未从正常人肺部分离SP-A的报道，并且关于SP-A在成人呼吸窘迫综合征和特发性肺纤维化等难治性肺部疾病中的动态和功能的信息也很少。这次，我们试图简化迄今为止复杂的SP-A纯化过程，目的是从少量临床标本中分离纯化SP-A，并研究其动力学和功能。今年上半年，作为基础研究，我们首先从大鼠肺灌洗液中纯化表面活性剂，并尝试分离SP-A。结果，当纯化的表面活性剂用EGTA处理以螯合钙时，SP-A从表面活性剂脂质中释放出来。这表明 SP-A 以钙依赖性方式与表面活性剂脂质结合，并证明该特性可应用于 SP-A 纯化。结果预计将发表在背面所示的论文中（J.Jpn.Med.Soc.Biol.Interface., 1994, In press）。今年下半年，我们一直在进行实验将该系统应用于临床标本。采用各种肺部疾病患者支气管镜检查的支气管肺泡灌洗液或尸检的肺灌洗液作为临床标本，通过多次重复超速离心从这些灌洗液中纯化出表面活性剂。目前，我们正在根据上半年的基础数据，采用钙螯合法纯化SP-A。我们还计划通过使用 SDS 电泳和凝胶过滤的蛋白质分析，以及通过其抑制大鼠 II 型肺泡上皮细胞分泌表面活性剂脂质的能力来研究其结构特征和功能，并将结果发表在论文中。