細胞膜骨格蛋白質リン酸化反応の病態生理的意義についての研究

细胞膜骨骼蛋白磷酸化反应的病理生理意义研究

• 批准号: 05770146
• 负责人: 松岡 洋一郎
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Mie University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770146/
• 关键词: 細胞膜骨格; 蛋白質リン酸化; 血小板

4.1蛋白質は、スペクトリン、アクチンとともに赤血球膜骨格の主要構成要素である。4.1蛋白質はスペクトリンと結合することにより、4.1蛋白質-スペクトリン-Fアクチンの安定複合体形成を促進する。試験管内実験では、4.1蛋白質のリン酸化は、4.1蛋白質とスペクトリンとの結合を抑制し、4.1蛋白質のスペクトリン-アクチン複合体形成促進作用を阻害する。しかしながら、細胞内において4.1蛋白質のリン酸化反応と膜骨格-アクチン相互作用との間に直接的関連があるか否かは不明であった。4.1蛋白質とスペクトリンが血小板にも存在することから、血小板を用いてこの問題点を検討した。まず、赤血球より4.1蛋白質とスペクトリンを精製後、抗原とし、血小板の相同蛋白質と反応する抗体を作成した。得られた抗体を用いて、血小板の活性化に伴う4.1蛋白質、スペクトリンの細胞内分布変化及び4.1蛋白質のリン酸化反応について解析した。非刺激血小板では4.1蛋白質はリン酸化状態にあり、スペクトリンと4.1蛋白質はトライトン可溶性画分に存在した。血小板をトロンビンで刺激すると4.1蛋白質は速やかに脱リン酸化され、脱リン酸化量と平行してスペクトリンと4.1蛋白質がトライトン不溶性細胞骨格画分へ移行した。以上の結果より、4.1蛋白質のリン酸化-脱リン酸化反応が細胞膜骨格-アクチン相互作用の制御機構の一つであることが示唆された。

4.1 蛋白质与血影蛋白和肌动蛋白一起是红细胞膜骨架的主要成分。 4.1 蛋白通过与血影蛋白结合促进稳定的 4.1 蛋白-血影蛋白-F-肌动蛋白复合物的形成。体外实验表明，4.1蛋白的磷酸化抑制4.1蛋白与血影蛋白之间的结合，并抑制4.1蛋白促进血影蛋白-肌动蛋白复合物形成的能力。然而，尚不清楚4.1蛋白磷酸化反应与细胞内膜骨架-肌动蛋白相互作用之间是否存在直接关系。由于 4.1 蛋白和血影蛋白也存在于血小板中，因此我们使用血小板研究了这个问题。首先，他们从红细胞中纯化了 4.1 蛋白和血影蛋白，将它们用作抗原，并创建了与血小板中同源蛋白发生反应的抗体。使用获得的抗体，我们分析了与血小板活化相关的4.1蛋白和血影蛋白的细胞内分布的变化以及4.1蛋白的磷酸化反应。在未刺激的血小板中，4.1蛋白处于磷酸化状态，并且血影蛋白和4.1蛋白存在于Triton可溶级分中。当用凝血酶刺激血小板时，4.1蛋白迅速去磷酸化，并且与去磷酸化的量平行，血影蛋白和4.1蛋白被转移到triton不溶性细胞骨架部分中。上述结果表明4.1蛋白的磷酸化-去磷酸化反应是控制细胞膜骨架-肌动蛋白相互作用的机制之一。

项目成果

Yoichiro Matsuoka: "Mediation of the physiological response of platelets by interaction of spectrin and protein 4.1 with the cytoskeleton" Biochemical and Biophysical Research Communications. (印刷中). (1994)

Yoichiro Matsuoka：“血影蛋白和蛋白质 4.1 与细胞骨架的相互作用介导血小板的生理反应”《生物化学和生物物理研究通讯》（出版中）。