平滑筋におけるアクチン連関収縮制御機構研究

平滑肌肌动蛋白相关收缩控制机制的研究

基本信息

批准号：
05770060
负责人：
石川良樹
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770060/
关键词：
平滑筋収縮アクチンミオシンカルデスモン

项目摘要

(1)カルデスモンをNTCBで切断し、DEAE-カラム、ゲル濾過カラムにより18kDaのN-端断片を得た。この断片はアクチン結合部位、カルモジュリン結合部位を含まず、ミオシン結合部位のみを含んでいた。またカルデスモンをalpha-キモトリプシンで切断し、DEAE-カラム、カルモジュリンアフイニテイカラムにより、38kDaのC-端断片を得た。この断片はアクチン結合部位、カルモジュリン結合部位を含み、ミオシン結合部位は含まれていなかった。モ-テイリテイアッセイ法、ATPase活性法により、これらの断片がアクチンミオシン相互作用に及ぼす影響を調べたところ、N-端断が促進、C-端断片が阻害効果があることが分かった。以上の結果はカルデスモンがアクチンに結合することにより平滑筋収縮を阻害する方向に、またミオシンに結合することにより促進の方向に制御していることを示唆している。ミオシン軽鎖キナーゼ(MLCK)をCNBrで切断し、DEAE-カラム、フェニルセファロースカラムにより、29kDaのN-端断片を得た。この断片はアクチン結合部位を含むが、キナーゼ部位は含んでいなかった。この断片はインタクトなMLCKと同様に、アクチンミオシン相互作用を阻害した。この結果は、MLCKがアクチンに結合することによって、平滑筋収縮をキナーゼ活性を介さずに負の方向に制御していることを示唆している。

(1)用NTCB切割Caldesmon，并使用DEAE柱和凝胶过滤柱获得18kDa N末端片段。该片段不包含肌动蛋白结合位点或钙调蛋白结合位点，而仅包含肌球蛋白结合位点。另外，用α-胰凝乳蛋白酶裂解caldesmon，并使用DEAE柱和钙调蛋白亲和柱获得38kDa的C末端片段。该片段包含肌动蛋白结合位点、钙调蛋白结合位点，但不含肌球蛋白结合位点。当我们使用迁移率测定和ATP酶活性方法研究这些片段对肌动蛋白-肌球蛋白相互作用的影响时，我们发现N端裂解具有促进作用，而C端片段具有抑制作用。这些结果表明，钙结合蛋白通过与肌动蛋白结合抑制平滑肌收缩，并通过与肌球蛋白结合促进平滑肌收缩。用 CNBr 裂解肌球蛋白轻链激酶 (MLCK)，并使用 DEAE 柱和苯基琼脂糖柱获得 29kDa N 末端片段。该片段包含肌动蛋白结合位点，但不含激酶位点。该片段抑制肌动蛋白-肌球蛋白相互作用，类似于完整的 MLCK。这一结果表明，MLCK 通过与肌动蛋白结合，负向调节平滑肌收缩，而无需介导激酶活性。