生体内カフェイン様物質サイクリックADPリボースの副腎髄質細胞における合成経路の存在とCa2^+動員作用

体内咖啡因样物质环ADP-核糖的合成途径及其在肾上腺髓质细胞中Ca2^+动员效应的存在

基本信息

批准号：
05856057
负责人：
寺岡宏樹
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Rakuno Gakuen University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.副腎髄質におけるcADPR合成経路の存在.ウニ卵ホモジネートからのCa^<2+>放出を指標としてcADPR活性を測定した(後述)。ウシ副腎髄質ホモジネートとbeta-NADのインキュベート上清は、ラットの各臓器とともにcADPR活性を示した。alpha-NADでは活性は見られなかった。2.カテコールアミン分泌刺激によるcADPRの産生アセチールコリン(100muM)はカテコールアミン分泌およびCa^<2+>放出の最大反応を起こしたが、ウニ卵ホモジネートからのCa^<2+>放出を指標とした時のcADPR活性は認められなかった。3.cADPRのCa^<2+>放出作用とその性質.副腎髄質ホモジネートは時間および温度依存性に^<45>Caを取り込んだ。^<45>Ca取込みはATP濃度依存性(0-1mM,ED50 0.5mM)であったが、ATP非存在下でも有意な取込みがあった。50muMまでのIP3およびcADPRは^<45>Ca取込みに顕著な影響を与えなかった。IP3やcADPRにより放出されるCa^<2+>量が取り込まれたもののごく一部であれば^<45>Caトレーサー法では検出されない可能性があるので、Fura2を用いて、ホモジネートから放出されるCa^<2+>放出を測定した。IP3は濃度依存性(10-20000nM,ED50 500nM)にCa^<2+>放出を起こし、その程度は負荷したCa^<2+>量に依存していた。IP3の効果はthapsigarginの前投与により消失し、ヘパリンにより濃度依存性(0-200mug/ml,IC50 10mug/ml)に抑制された。しかし、cADPRは1muMの高濃度でも全く影響を与えなかった。同様に、ラット大脳ホモジネートにおいても、IP3はCa^<2+>を放出させたが、cADPRは効果が見られなかった。一方、cADPRの作用が最初に報告されたウニ卵のホモジネートでは、同濃度のcADPRはCa^<2+>を放出させた。以上の成績より、ウシ副腎髄質にはbeta-NADをcADPRに変換する酵素は存在するが、アセチールコリンによりcADPRは産生されず、またcADPRにより作動するCa^<2+>放出系も存在しないことが示唆された。また、ラットの各臓器における成績を考慮すれば、cADPRが細胞内セカンドメッセンジャーとして哺乳類細胞内のCa^<2+>放出を制御している可能性は低いものと想像される。

1.以海胆卵匀浆释放的Ca 2+ 为指标，测定肾上腺髓质中cADPR合成途径的存在(后述)。与牛肾上腺髓质匀浆一起孵育的 β-NAD 上清液与大鼠器官一起显示出 cADPR 活性。 α-NAD 没有观察到活性。 2.刺激儿茶酚胺分泌产生cADPR 乙酰胆碱(100μM)引起儿茶酚胺分泌和Ca 2+ 释放的最大反应，但以海胆卵匀浆中Ca 2+ 释放作为指标。当时没有观察到 cADPR 活性。 3.cADPR的Ca 2+ 释放作用及其性质，以时间和温度依赖性方式吸收+ 45 Ca。 ^ 45 Ca吸收依赖于ATP浓度(0-1mM，ED 50 0.5mM)，但即使在不存在ATP的情况下也存在显着的吸收。 IP3和高达50μM的cADPR对^ 45 Ca摄取没有显着影响。如果IP3或cADPR释放的Ca 2+ 量是吸收量的一小部分，则可能无法通过 45 Ca示踪剂方法检测到Ca 2+ 释放量。。 IP3以浓度依赖性方式(10-20000nM，ED50 500nM)引起Ca 2+ 释放，并且程度取决于负载的Ca 2+ 量。预先给予毒胡萝卜素可消除IP3的作用，并以浓度依赖性方式被肝素抑制(0-200mug/ml，IC50 10mug/ml)。然而，即使在1μM的高浓度下，cADPR也没有效果。类似地，在大鼠脑匀浆中，IP3释放Ca 2+ ，但cADPR没有作用。另一方面，在首次报道cADPR作用的海胆蛋匀浆中，相同浓度的cADPR释放Ca 2+ 。由以上结果可知，虽然牛肾上腺髓质中存在将β-NAD转化为cADPR的酶，但cADPR不是由乙酰胆碱产生的，并且也不存在由cADPR激活的Ca 2+ 释放系统。那。此外，考虑到大鼠各器官中的结果，cADPR不太可能作为细胞内第二信使控制哺乳动物细胞中的Ca 2+ 释放。