生体内カフェイン様物質サイクリックADPリボースの副腎髄質細胞における合成経路の存在とCa2^+動員作用

体内咖啡因样物质环ADP-核糖的合成途径及其在肾上腺髓质细胞中Ca2^+动员效应的存在

• 批准号: 05856057
• 负责人: 寺岡 宏樹
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Rakuno Gakuen University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05856057/
• 关键词: イノシトール3燐酸; カルシウムイオン; サイクリックADPリボース; 副腎髄質; イノシトール3燐酸; カルシウムイオン; サイクリックADPリボース; 副腎髄質

1.副腎髄質におけるcADPR合成経路の存在.ウニ卵ホモジネートからのCa^<2+>放出を指標としてcADPR活性を測定した(後述)。ウシ副腎髄質ホモジネートとbeta-NADのインキュベート上清は、ラットの各臓器とともにcADPR活性を示した。alpha-NADでは活性は見られなかった。2.カテコールアミン分泌刺激によるcADPRの産生 アセチールコリン(100muM)はカテコールアミン分泌およびCa^<2+>放出の最大反応を起こしたが、ウニ卵ホモジネートからのCa^<2+>放出を指標とした時のcADPR活性は認められなかった。3.cADPRのCa^<2+>放出作用とその性質.副腎髄質ホモジネートは時間および温度依存性に^<45>Caを取り込んだ。^<45>Ca取込みはATP濃度依存性(0-1mM,ED50 0.5mM)であったが、ATP非存在下でも有意な取込みがあった。50muMまでのIP3およびcADPRは^<45>Ca取込みに顕著な影響を与えなかった。IP3やcADPRにより放出されるCa^<2+>量が取り込まれたもののごく一部であれば^<45>Caトレーサー法では検出されない可能性があるので、Fura2を用いて、ホモジネートから放出されるCa^<2+>放出を測定した。IP3は濃度依存性(10-20000nM,ED50 500nM)にCa^<2+>放出を起こし、その程度は負荷したCa^<2+>量に依存していた。IP3の効果はthapsigarginの前投与により消失し、ヘパリンにより濃度依存性(0-200mug/ml,IC50 10mug/ml)に抑制された。しかし、cADPRは1muMの高濃度でも全く影響を与えなかった。同様に、ラット大脳ホモジネートにおいても、IP3はCa^<2+>を放出させたが、cADPRは効果が見られなかった。一方、cADPRの作用が最初に報告されたウニ卵のホモジネートでは、同濃度のcADPRはCa^<2+>を放出させた。以上の成績より、ウシ副腎髄質にはbeta-NADをcADPRに変換する酵素は存在するが、アセチールコリンによりcADPRは産生されず、またcADPRにより作動するCa^<2+>放出系も存在しないことが示唆された。また、ラットの各臓器における成績を考慮すれば、cADPRが細胞内セカンドメッセンジャーとして哺乳類細胞内のCa^<2+>放出を制御している可能性は低いものと想像される。

1。肾上腺髓质中CADPR合成途径的存在。使用Ca^<2+>从海胆鸡蛋匀浆中释放作为指数来测量CADPR活性（见下文）。牛肾上腺髓质匀浆和β-NAD孵育的上清液与大鼠的每个器官一起表现出CADPR活性。在α-NAD中未观察到活性。 2。通过刺激儿茶酚胺分泌（100 MUM）来产生CADPR，导致儿茶酚胺分泌和Ca^<2+>释放的最大反应，但是当将CA^<2+>从海胆鸡蛋中释放时，没有观察到CADPR活性。 3。Ca^<2+>释放效果及其特性CADPR。肾上腺髓质匀浆以时间和温度依赖的方式掺入 ^<45> Ca。 ^<45> Ca的吸收是ATP浓度依赖性（0-1 mm，ED50 0.5 mm），但即使在没有ATP的情况下，也有明显的吸收。 IP3和CADPR高达50个妈妈对 ^<45> CA的吸收没有显着影响。由于IP3或CADPR释放的Ca^<2+量的一小部分可能无法通过^<45> Ca示踪方法检测到，因此使用Fura2来测量从匀浆中释放的Ca^<2+>释放。 IP3以浓度依赖性方式（10-20000 nm，ED50 500 nm）引起Ca^<2+>释放，并且其程度取决于加载的Ca^<2+>的量。通过thapsigargin预先给药消除了IP3的效果，并以肝素的浓度依赖性方式（0-200mug/mL，IC50 10MUG/ml）抑制。但是，即使在高浓度为1妈妈的情况下，CADPR也没有作用。同样，IP3在大鼠脑匀浆中释放了Ca^<2+>，但CADPR没有影响。另一方面，在首次报道了CADPR效果的海胆卵中，CADPR以相同的浓度释放了Ca^<2+>。这些结果表明，尽管有一种酶将β-NAD转换为牛肾上腺髓质中的CADPR，但CADPR并未由乙酰胆碱产生，并且没有CADPR激活的Ca^<2+>释放系统。此外，考虑到每个大鼠每个器官的性能，CADPR不太可能是调节哺乳动物细胞中Ca^<2+>释放的第二个细胞内信使。