大腸菌染色体分配に関与するMukB蛋白が認識する大腸菌染色体領域の解明

阐明参与大肠杆菌染色体分离的 MukB 蛋白识别的大肠杆菌染色体区域

基本信息

批准号：
05854076
负责人：
仁木宏典
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05854076/
关键词：
MukB蛋白 E.coli DNA結合蛋白 RNA結合蛋白 rRNA

项目摘要

MukB蛋白はDNA配列に結合するが、特異的DNA配列を認識して強く結合するか探索を行なった。合成したランダムな配列のDNAからMukB蛋白が強く結合するDNA配列を選択しPCR法によりDNAを増幅する方法を行なっているが、まだ特異的配列は見つかっていない。塩濃度などの条件を検討し現在も継続して解析を行なっている。その一方で、精製過程におけるMukB蛋白の挙動に注目しMukB蛋白のDNA結合能について解析した。MukB蛋白は牛胸線由来のDNAセルロースに容易に結合するが、一部分のMukB蛋白は結合せずに素通りする。この理由として、MukB蛋白がすでにで大腸菌由来のDNAに結合しており牛胸線由来DNAセルロースに結合しないのではないかと考えた。この分画を調べたところ、260nmに吸収極大が見られた。フェノール抽出した標品はDNase非感受性でRNaseに感受性があることからDNAではなくRNAが含まれていることが明かとなった。分離したRNAは平均長が100bp程であった。ゲルシフト法及びフィルター結合法によりMukB蛋白がこのRNAに結合することを確認した。MukB蛋白のRNA結合能はyeast tRNAを用いても観察された。精製過程の分画内に含まれていたRNAからcDNAを作成し47クローンについてその塩基配列を決めデータベースで検索したところ、その大半がリボソームRNAに由来するものであった。うちわけは11クローンが16S、30クローンが23SリボゾームRNA塩基配列が一致した。MukB蛋白のDNA、RNAに対する解離定数はそれぞれ0.19、0.23muMとほぼ同じで非特異的配列に対して結合しているものと考えられる。このことから、MukB蛋白はDNAとRNA両方に結合する蛋白であることが明かとなった。

MUKB蛋白与DNA序列结合，但已被识别为特定的DNA序列，并搜索了强烈的结合。 MUKB蛋白的DNA序列通过合成的随机阵列DNA强烈结合，并且PCR方法被放大，但尚未发现特定序列。我们检查盐浓度等条件并继续分析。另一方面，我们分析了MUKB蛋白在纯化过程中关注MUKB蛋白的行为的DNA结合能力。 MUKB蛋白很容易粘合到源自牛肉肖像的DNA纤维素，但一些MUKB蛋白通过而无需结合。原因是MUKB蛋白已经与源自大肠杆菌的DNA结合，并且不可能与源自牛乳腺线的DNA纤维素结合。在检查了这一分裂后，在260nm处看到了最大吸收。苯酚提取的项目对DNase不敏感，对RNase敏感，因此包括RNA。分离的RNA的平均长度约为100 bp。已证实，通过Gelsift定律和滤镜匹配方法将MUKB蛋白粘在该RNA中。还使用酵母tRNA观察到MUKB蛋白的RNA键能力。当从纯化过程中包含的RNA中产生cDNA时，确定了47个克隆并在数据库中搜索，其中大多数是从核糖体RNA得出的。由于原因，11个克隆16S和30个克隆与23S旋转曲线RNA碱基序列匹配。 MUKB蛋白DNA和RNA的解剖常数被认为与非特异性序列结合，分别与0.19和0.23 MUM相同。这表明MUKB蛋白是一种结合DNA和RNA的蛋白质。