Bacteroides属LPSの免疫生物活性発現機序に関する研究

拟杆菌脂多糖免疫生物学活性表达机制研究

基本信息

批准号：
03670855
负责人：
梅本俊夫
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kanagawa Dental College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至 1992
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03670855/
关键词：
Bacteroides LPS リピドA 化学構造リンパ球への結合性 KDOーリン酸

项目摘要

今年度の研究ではLPSの免疫生物活性を担っているリピドA部分の構造について検討した。リピドAの単離はLPSを5%酢酸で100℃2時間処理後クロロホルム/メタノール(3:1)抽出により行った。構造解析の為の脱O-アシル化は弱ヒドラジン分解で、アミド結合脂肪酸の切断は強ヒドラジン分解で行い、全メチル化は箱守法により行った。リピドA画分および得られた誘導体の分析はFab-MSにより行った。その結果、Porphyromonas(Bacteroides) gingivalisのリピドA中の構成脂肪酸は、3-OHisoC17:0が主で、他にC16:0,iso C15:0および3-OHC16:0が検出された。またグルコサミンとリン酸はそれぞれ17%と3.1%含まれていた。リピドA画分のFab-MSにおいてはグルコサミンジサッカライドおよびモノサッカライドが検出され、それぞれに異る脂肪酸との結合の可能性が示唆された。リピドAの骨格構造を調べるためにLPSを脱O-アシル化後弱酸加水分解を行ってFab-MSで調べたところ、3、3'位のアミノ基に3-OHisoC17:0が結合したグルコサミンジサッカライドに相当するm/z878[M+H]+およびm/z900[M+Na]+が検出された。さらにメチル化した誘導体をGLC/MSにより分析した結果、β(1-6)グルコサミンジサッカライドが検出された。今回の実験条件でリピドAの単離が可能であつたことから従来不明であったBacteroides属のリピドA構造の一部を明らかにすることが出来た。現在得られた結果から推定できるP.gingivalisのリピドAの構造は、構成脂肪酸の種類とリン酸の結合位置が腸内細菌型のLPSと異ってはいるものの、特に細胞への結合様式に影響を与えるものとは考えられない。事実、C3H/HeJマウスの脾細胞に対するB-LPSとE-LPSの結合性をフローサイトメーターを用いて比較したところ、同様の結合性を示すことが明らかになった。

在今年的研究中，我们研究了脂质 A 部分的结构，该部分负责 LPS 的免疫生物学活性。通过用 5% 乙酸在 100°C 处理 LPS 2 小时，然后用氯仿/甲醇 (3:1) 萃取来分离脂质 A。对于结构分析，通过弱肼解进行脱O-酰化，通过强肼解进行酰胺键脂肪酸的裂解，通过Hakomori方法进行全甲基化。通过 Fab-MS 分析脂质 A 级分和获得的衍生物。结果，牙龈卟啉单胞菌脂质A的组成脂肪酸主要为3-OHisoC17:0，还检测到C16:0、isoC15:0和3-OHC16:0。另外，还分别含有17％的葡萄糖胺和3.1％的磷酸。在脂质 A 级分的 Fab-MS 中检测到氨基葡萄糖二糖和单糖，表明与不同脂肪酸结合的可能性。为了研究脂质A的主链结构，我们在LPS脱O-酰化后进行弱酸水解，并使用m/z878[M+H]+和m/z900[M+Na]对其进行研究。 + 检测到对应于糖类。通过 GLC/MS 对甲基化衍生物进行进一步分析，检测到 β(1-6) 葡萄糖胺二糖。由于可以在实验条件下分离脂质A，因此我们能够澄清以前未知的拟杆菌属脂质A的部分结构。从目前获得的结果可以推断，牙龈卟啉单胞菌脂质A的结构在脂肪酸类型和磷酸盐的结合位置上与肠杆菌LPS不同，但特别是在与细胞的结合方式上。不认为有任何影响。事实上，当使用流式细胞仪比较B-LPS和E-LPS与C3H/HeJ小鼠的脾细胞的结合特性时，发现它们显示出相似的结合特性。