同一再生軸索の経時的形態解析ーin vivo直接観察の試みー

同一再生轴突的时程形态分析 - 直接体内观察的尝试 -

• 批准号: 03670028
• 负责人: 遠山 稿二郎
• 金额: $ 0.83万
• 依托单位: Iwate Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03670028/
• 关键词: 再生軸索; ルシファ-イエロ-; DiI; 脊髄神経節; 生体内直接観察; 凍結融解神経移植; 経時的形態解析; ラット

本研究の目的は、末梢神経系における再生軸索の形態をin vivoで調べ、その経時的変化を明らかにすることである。その第一段階として、ラット脊髄神経節(DRG)内に、当初、標織物質として予定していたルシファ-イエロ-を投与し、どの程度の生存期間で移植片内の再生軸索先端部に達するかを検討した。その結果、移植片内の再生軸索には本色充は認められず、本研究の実験期間(7日以内)では移植片まで到達しないことが示された。そこで、これに替わる標識物質としてDilを用いたところ、投与後5日で、多くの蛍光性色素を含む再生軸索が移植片内で観察され、標識物質の移動距離の点ではDilがより優れていることが明らかとなった。しかし、Dil投与例では、軸索内の色素が小顆粒状に観察されることが多く、ルシファ-イエロ-と比較し、必ずしもその形態を忠実に表現していない。この点を考慮し、以下のような新たな実験系を考案した。DRGを坐骨神経の近くに移植し、このDRGに直接、凍結融解神経束を縫合し、ここから移植片内に再生する軸索の形態について検討を加える系である。その基礎実験として、ラットのDRG(L4、L5)を大腿部の坐骨神経近くに2週間おいと所、移植されたDRGの神経細胞は生着し、多くの再生軸索を伸長することが確かめられた。この系では移植片と細胞体の距離が格段に近くなり、ルシファ-イエロ-が再生軸索先端まで到達することが十分期待できる。なお。色素蛍光の観察時の励起光による減衰と言う問題点もある。各時期での結果を通常の落射型蛍光顕微鏡で一度写真撮影すると、次の時期には蛍光性が失われ、同一部位の新たな写真撮形ができない結果となった。今後、より明るいレンズ系、微弱な蛍光でも感知できるテレビカメラ/ビデオ録画装置の使用が必要となろう。以上、再生軸索の生体内観察を実現するため克服すべき具体的課題が明らかとなった。

本研究的目的是研究体内周围神经系统再生轴突的形态并阐明其随时间的变化。第一步，将原本计划作为标准材料的荧光黄注射到大鼠脊髓神经节（DRG）中，我考虑了移植物内再生的轴突尖端需要多长时间才能存活。达到它。结果显示，在本研究的实验期间（7天内）移植物内的再生轴突并未到达移植物。因此，当使用Dil作为替代标记物质时，给药5天后在移植物内观察到含有许多荧光染料的再生轴突，并且Dil在标记物质的移动距离方面更优越。然而，在 Dil 给药的情况下，轴突内的色素经常以小颗粒的形式观察到，并且与荧光黄相比，色素不一定忠实地代表其形态。考虑到这一点，我们设计了如下新的实验系统。在该系统中，将 DRG 移植到坐骨神经附近，将冻融的神经束直接缝合到 DRG，并研究移植物内从那里再生的轴突的形态。作为基础实验，我们将大鼠DRG（L4、L5）放置在大腿坐骨神经附近2周，证实了移植的DRG神经细胞植入并延伸了许多再生轴突。在这个系统中，移植物和细胞体之间的距离变得更近，完全可以预期荧光黄将到达再生轴突的尖端。此外。在观察染料荧光时还存在由于激发光而衰减的问题。当使用常规落射荧光显微镜对每个时期的结果拍摄一次时，荧光在下一个时期消失，从而无法拍摄同一区域的新照片。未来，有必要使用更亮的镜头系统和电视摄像机/视频记录设备，以检测甚至微弱的荧光。如上所述，已经阐明了为了实现再生轴突的体内观察而需要克服的具体问题。