細菌細胞壁に共有結合したポリアミンに関する生理化学的及び分子生物学的研究

共价结合细菌细胞壁的多胺的生理化学和分子生物学研究

基本信息

批准号：
03660099
负责人：
神尾好是
金额：
--
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究代表者は細胞壁ペプチドグリカンに共有結合したポリアミンの細胞内における生理的役割及び存在状態を生化学的及び分子生物学的に研究を行ない本年度内に次のことを明らかにした。[1]偏性嫌気性菌Anaerovibrro lypolyticaにおいて、ペプチドグリカンにスペルミジンが、Dーグルタミン酸残基のαカルボキシル基に共有給合していることが明らかになった。スペルミジンは ^1NH_2ーCH_2ーCH_2ーCH_2 ^4NHー(CH_2)_4 ^8NH_2の化学構造をとり非対称構造をしていることから、どのアミノ基がカルボキシル基と共有結合しているかを明らかにするため、本菌のペプチドグリカンからスペシルミジンを含むペプチド部分をNーアセチルムラミルLーアラニルアミダ-ゼ処理して調整し、DNP化して、結合の方向性を決定した。標準物質である1ーアミノDNP化スペルミジン,4ーアミノDNPースペルミジン及びNー8アミノDNP化スペルミジンをそれぞれ有機合成し、シリカゲル薄層クロマトグラフィ-で検討した。その結果、スペルミジンの ^1N位のアミノ基がグルタミン酸のαーカルボキシル基に給合していることが判明した。[2]Selenomonas ruminantiumにおけるリピド中間体:ジアミン転移酸素の遺伝子のクロ-ニング:本菌から染色体DNAを分離精製し、制限酵素Suu3Aで部分分解し、シヤロミドベクタ-DNAのBamHIサイトに押入し、in vito パッケ-ジングにより、本菌の染色体遺伝子のジ-ンバンクを作製した。大腸菌に形質転換し、アンピシリン酸性クロ-ンを彩取し、これうを、 ^<14>Cーカダベリン含有寒天LB培地で生育させ、メンブランにブロッチイング後TCA洗保後 ^<14>Cーカダベリングが酸不溶性画分に取り込まれたクロ-ンを検索した。その結果、アンピシリン耐性クロ-ン約10,000個から1個の陽性クロ-ンが得られた。このクロ-ンは上記酸系遺伝子をもつものと推定された。

首席研究者对多胺的生理作用和存在与细胞壁肽聚糖的生理作用和存在进行了生化和分子生物学研究，并在今年揭示了以下情况。 [1]据揭示，精子可以共价喂给肽甘氨酸，向dlovibroro lypolytica中的D-谷氨酸残基的α-羧基喂入α-羧基。因为超胺具有 ^1NH_2-CH_2-CH_2-CH_2-CH_2-CH_2-CH_2-CH_2-CH_2-CH_2 ^4NH-（CH_2）_4 ^8NH_2的化学结构的不对称结构来自该细菌的肽聚糖的L-丙酰酰胺酶，并将其转换为DNP，并确定结合方向。有机合成了标准物质1-氨基-DNP添加的精子，4-氨基-DNP添加的精子素和N-8-氨基-DNP添加的精子氨基氨基胺，并通过Silica Gel薄层色谱法检查，并通过硅胶凝胶层色谱法检查。结果，发现精子的 ^1n位置的氨基群被喂入谷氨酸的α-羧基。 [2] Lipido Intermediate in Selenomonas ruminantium: Cloning of the gene for diamine-transferred oxygen: Chromosomal DNA was isolated and purified from this bacteria, partially decomposed with the restriction enzyme Suu3A, and crossed into the BamHI site of the syalomido vector DNA, and in vito packaged the diambank of the chromosomal该细菌的基因。将细胞转化为大肠杆菌，并在含有 ^<14> c-cadaverin的琼脂LB培养基中涂色，并将其种植在含有 ^<14> c-cadaverin的琼脂LB培养基中，并在将TCA洗涤后斑点后，将克隆种植在其中，其中 ^<14> c-cadaverin被纳入了酸 - c-cadverin中，并将其掺入酸 - c-caderin nocus-insoluble fratialseclation seareed seecred seecred seareed。结果表明，从约10,000个抗氨苄青霉素的克隆中以阳性克隆。假定该克隆在上面具有基于酸的基因。