^<18>O標識体を利用する組織中生理活性物質の超高感度分析

^<18>使用O标记物质对组织中的生理活性物质进行超灵敏分析

基本信息

批准号：
63571016
负责人：
後藤順一
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、ガスクロマトグラフィー(GC)-マススピクトロメトリー(MS)の高分離能と負イオン検出法の高感度、高選択性に着目し、^<18>O標識体を利用する生理活性物質の超高感度測定法を確立し、病態の解析に資することを目的とした。まず、胆汁酸の負イオン検出GC-MS用誘導体化法に種々検討を加えた。その結果、カルボキシン基をペンタフルロベンジル(PFB)エステルに、水酸基をジメルエチルシリル(DMES)エーテルに導くとき、胆汁酸異性体の相互分離に優れるばかりか、負イオン検出MSにおいてPFB基の脱離したカルボキシレートアニオン [M-181] ~をきわめて強く生成し、これを利用する選択イオン検出法における感度が4attmoleにも達することを見出した。ついで内部標準物質として安定同位体標識胆汁酸の調整を行った。従来、本目的には^2H標識体が用いられているが、その調整には煩雑な操作が要求されるばかりか、標識純度の高いものが得にくい。そこでカルボニル酸素の交換反応を利用するステロイド核上水酸基への^<18>Oの定量的導入法を考案した。すなわち、遊離型、グリシンあるいはタウリン抱合型胆汁酸を対応するオキソ体に変換後カリウム塩に導き、H_2^<18>O中90℃、50時間加温した。ついで重水素化ホウ素ナトリウムで還元し [^<18>O-^2H] 二重標識胆汁酸を調製した。ひきつづき組織中胆汁酸の効果的なクリーン・アップ法に吟味を加え、負イオン検出GC-MSと逆同位体希釈法とを組み合わせた肝組織中胆汁酸の超微量分析法を確立した。本法は、感度、特異性に優れ、湿重量1mg以下の肝組織でも十分胆汁酸を測定することが可能であった。さらに本法が肝UDPグルクロニルトランスフェラーゼ活性の測定にもきわめて有用であることを明らかにした。

这项研究的重点是气相色谱（GC） - 马斯波克仪（MS）的高分辨率，高敏性和高选择性，并且是使用迹象的生理和活性物质。建立一种超高敏感性测量方法，并有助于对病情的分析。首先，检查了各种检查以对GC-MS的胆汁酸负离子检测。结果，当羧基组被带到pentoflu叶烯唑（PFB）酯，羟基酯（hydroxyl of to Zimelethylsilyl（DMES））以太乙醚时，它不仅在胆汁 - 孔子的互连中也很出色，而且在负离子检测中也很出色MS。已经发现，扣除的羧酸盐阴离子[M-181]〜非常生成，并且使用此方法的选择离子检测方法的敏感性可以达到4attmole。然后，作为一种内标物质，调整了稳定的同位素签名的胆汁酸。过去，^2H符号用于此目的，但调整不仅是一个复杂的操作，而且很难获得高特异性的纯度。因此，我们将一种使用羰基氧的替代反应的类固醇核羟基设计了一种定量介绍方法。换句话说，在将自由类型，甘氨酸或牛磺酸蛋白混合的胆汁酸转换为兼容的氧牛体后，转化为钾盐，并加热90°C，在H_2^<18> O中进行50小时，50小时。此外，制备了重水的硼基钠[^<18> o-^2H]双签名的胆汁酸。该公司已被检查采用有效的清洁方法，并建立了一种超轨道特异性肝组织，该组织结合了负离子检测GC-MS和相反的位置稀释方法。即使在肝组织中，这种方法也能够充分测量胆汁酸，具有出色的敏感性和特异性，湿重为1 mg或更少。此外，已经揭示了该定律对于测量肝UDP葡萄糖转移酶活性非常有用。