ヒト肝癌細胞により分泌されるNovel lipoproteinの研究

人肝癌细胞分泌的新型脂蛋白的研究

• 批准号: 63570554
• 负责人: 山本 徹也
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Hyogo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1988
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1988 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-63570554/
• 关键词: HuH-7 cell; apo B-containing lipoprotein; apo A-I-containing lipoprotein; apo B-100; apo A-I

Human hepatoma cell line(HuH-7)のmedium中に分泌されるlipoproteinのlipidはd.<1.063g/ml fraction3.5%、d.1.063〜1.210g/ml fraction 70.9%、d>1.210g/ml fraction 23.6%の分布を示した。またapolipoproteinA-I(apoA-I)、A-II(apoA-II)、B(apoB)及びE(apoE)の各々も各fractionすべてに認められた。それ故ヒト血漿のように超遠心による分画では数種のlipoproteinが混在しているため、我々はaffinity columnを用いて特にapoB及びapoA-I-containing lipoproteinを精製し、その性状を検討した。以前報告した結果に加えてapoB-containing lipoproteinはSDS-PAGE及びimmunoblbotによりapo B-100を所有していることが明らかになった。またこのlipoproteinはagar gel electrophoresisにて一部anode側に泳動されたが、agar gel electrophoresisにてanode側に泳動されるlipoproteinX及びYとは明らかにその性状は異なっていた。このlipoproteinは血漿LDLと同様ConcanavalinAと反応するが血漿LDLとは異なってRicinus communis agglutininとは反応しなかった。このことは少なくともapo B-containing lipoproteinの表面に存在するcarbohydrateはD-galactoseを含んだsugar chainが無いか非常に少ないことを示唆しているものと思われた。一方apo A-I-containing lipoproteinはagarose gel electrophoresisにてα-lipoproteinより遅く泳動されmain bandはpre betaの位置に認められた。このlipoproteinはprotein/lipid比が約4.8でfree cholesterol、triglyceride及びphospholipidを所有していたがcholesteryl esterは明らかではなかった。またこのlipoproteinのapo A-Iは12.5%、SDS-PAGE及びそのimmunoblotにて血漿HDLのapo A-Iと同じ移動度を示した。Isoelectric focusing gel electrophoresis及びそのimmunoblotでもapo A-I_4、apo A-I_5、apo A-I_6が認められた。Hep G-2のmedium中ではapo A-I_2及びapo A-I_3のみの存在が認められているため、HuH-7のmedinm中にapo A-I_2のNH_2-terminal hexo-peptideを切断するproteaseが存在しているものと思われた。

人肝癌细胞系(HuH-7)培养基中分泌的脂蛋白的脂质为d.<1.063g/ml组分3.5％，d.1.063～1.210g/ml组分70.9％，d>1.210g/ml。分布比例为 23.6%。此外，在所有级分中还观察到载脂蛋白 A-I (apoA-I)、A-II (apoA-II)、B (apoB) 和 E (apoE)。因此，由于在人血浆等超速离心分离中混合了多种脂蛋白，因此我们使用亲和柱专门纯化了含有apoB和apoA-I的脂蛋白，并检查了它们的特性。除了之前报道的结果外，通过SDS-PAGE和immunoblbot发现含apoB的脂蛋白具有apo B-100。此外，该脂蛋白的一部分在琼脂凝胶电泳中迁移至阳极侧，但其性质与在琼脂凝胶电泳中迁移至阳极侧的脂蛋白X和Y明显不同。这种脂蛋白与血浆 LDL 类似，与刀豆球蛋白 A 发生反应，但与血浆 LDL 不同的是，它不与蓖麻凝集素发生反应。这似乎表明至少含载脂蛋白B的脂蛋白表面上存在的碳水化合物没有或很少有含D-半乳糖的糖链。另一方面，含apo A-I的脂蛋白在琼脂糖凝胶电泳中比α-脂蛋白迁移慢，并且在前β位置观察到主条带。该脂蛋白的蛋白质/脂质比约为4.8，并含有游离胆固醇、甘油三酯和磷脂，但没有明显的胆固醇酯。此外，该脂蛋白的apo A-I在SDS-PAGE及其免疫印迹中显示出12.5%的迁移率，与血浆HDL的apo A-I的迁移率相同。等电聚焦凝胶电泳和免疫印迹也证实了apo A-I_4、apo A-I_5和apo A-I_6。由于Hep G-2培养基中仅发现apo A-I_2和apo A-I_3，因此在HuH-7培养基中似乎存在切割apo A-I_2的NH_2末端六肽的蛋白酶。

项目成果

YAMAMOTO,T.,et al: Clinica Chimica Acta.

YAMAMOTO,T.,et al:Clinica Chimica Acta。

YAMAMOTO,T.,et al: Biochimica et Biophysical Acta.

YAMAMOTO,T.,et al:Biochimica et Biophysical Acta。