レチノイン酸による分化脱がん時に初期応答する遺伝子群の解析

分析对视黄酸诱导的分化和癌症去除做出早期反应的基因

基本信息

批准号：
01015091
负责人：
村松喬
金额：
$ 2.37万
依托单位：
Kagoshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

胚性腫瘍細胞をレチノイン酸によって分化誘導した時に発現が増強するcDNAクローンMKおよびその遺伝子について研究を進めた。MK遺伝子の5′上流2キロベースをクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ(CAT)遺伝子につなぎ、胚性腫瘍細胞F9に導入すると、CAT活性がレチノイン酸によって誘導されるようになった。分化誘導の条件を変えた時に、MK遺伝子の発現は同様に起り、分化の方向性とMK遺伝子の発現の間に強い相関は認められなかった。レチノイン酸を培地から取り除くとMK遺伝子の発現は制えられ、レチノイン酸とレセプターの複合体がMK遺伝子の発現を直接制御している可能性が強い。MKcDNAをbetaーアクチンとウス肉腫ウイルスのプロモーターにつなぎ、L細胞に導入した。すると細胞外にMKポリペプチドが分泌され、MKポリペプチドは分泌タンパク質であることが判明した。また、ヘパリンアガロースカラムクロマトグラフィーの結果、MKポリペプチドはヘパリン結合能があることが判明した。ヘパリンを添加することにより、MKポリペプチドは安定化し、レチノイン酸処理した胚性腫瘍細胞の培地に分泌されていることも確認できた。以上のように、MKポリペプチドは成長因子と類似の性質を示す分子であり、細胞分化の制御に深くかかわっていると示唆された。MKポリペプチドの機能を直接的に検証するために、MKcDNAを導入したL細胞が分泌するMKポリペプチドを、CMセファデックス、フェニルセファロース、ヘパリンアガロースのカラムクロマトグラフィーを組み合せて、タンパク質としてかなりの純度まで精製した。

我们对cDNA克隆MK及其基因进行了研究，在这种基因中，当诱导视黄酸分化时，胚胎肿瘤细胞的表达得到了增强。当5公里上游2公里基碱基的MK基因连接到Chlorham苯酚糖酸转移酶（CAT）基因并引入胚胎肿瘤细胞F9时，CAT活性由视黄酸诱导。当改变分化诱导的条件时，MK基因的表达以相同的方式出现，并且分化方向与MK基因的表达之间没有很强的相关性。当从培养基中取出视黄酸时，控制MK基因的表达，并且具有强烈的视黄酸和受体的复合物可以直接控制MK基因的表达。 MKCDNA连接到β -AACTIN和US肉瘤病毒启动子，并引入L细胞。然后，MK多肽在细胞外分泌，发现MK多肽是一种分泌蛋白。此外，肝素琼脂糖色谱的结果表明，MK多肽具有肝素结合能力。通过添加肝素，还可以证实MK多肽在文本的胚胎肿瘤细胞的介质中被稳定并分泌。如上所述，有人提出MK多肽是一种分子，显示出与生长因子相似的特性，并且与细胞分化的控制深深涉及。为了直接验证MK多肽的功能，引入MKCDNA的L细胞分泌的MK多肽是CM Sepa Dex，苯基氯糖，肝素Agalose Colam色谱的组合，以将相当多的纯度视为蛋白质。