突然変異株を用いた哺乳類細胞増殖制御機構の研究

利用突变株研究哺乳动物细胞生长控制机制

• 批准号: 62580148
• 负责人: 花岡 文雄
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1987
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1987 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-62580148/
• 关键词: 突然変異株; 増殖制御機構; 情報伝達; DNA複製開始; 百日咳毒素; ts変異株; ユビキチン

本研究の目的は, 増殖制御機構のキー・ポイントである細胞膜上での増殖刺激と, その受容体からの情報伝達, および核での遺伝子DNAの複製開始の2点について, そこに関わる遺伝子およびその産物を同定し, 現在, ブラックボックスになっているこの2点の間を埋めていくことにある. そこで, マウスFM3AおよびSwiss3T3細胞の各種変異株を中心に解析した.1.増殖因子に対する要求性の異なる変異株の分離:Swiss3T3細胞に変異源を作用させ, 0.2%血清存在下, インスリンのみで増殖可能な変異株, ホルボールジブチレート(PDBu)のみで増殖可能な変異株を分離した.2.増殖因子に対する要求性の異なる変異株の解析:インスリン単独で増殖可能な変異株では血清非存在下, EGF単独でDNA合成が誘導でき, この誘導は百日咳毒素(IAP)に感受性であった. またこの誘導はPDBuでも阻害され, この系ではCキナーゼが阻害的に働くことが示唆された. 一方, PDBu単独で増殖する変異株ではこのような現象は観察されなかった.3.DNA複製開始に欠陥をもつ温度感受性(ts)変異株の分離と同定:FM3A細胞より新たに分離した変異株, tsFT5は高温でDNA合成が低下する性質をもつS期変異株である. これまでに当教室で得られているts変異株と相補性試験を行なった結果, G2期変異株として同定されているts85細胞と同じ相補性群に属することが明らかとなった. tsFT5の特徴は, 高温でDNA合成の低下にやや先立ってヒストンuH2Aの消失がみられることである. 培養温度を高温から低温にシフトすると, DNA合成の再開に先立ってuH2Aが現れた. DNA複製開始にはクロマチンの脱凝縮が必要と考えられ, そこでのヒストンH2Aのユビキチン化の関与が示唆される.今後, これらの変異株より抑制変異株の分離や変異遺伝子の同定を行ない解析を進めたい.

本研究的目的是研究参与增殖控制机制的两个关键点的基因：细胞膜上的生长刺激、其受体的信息传递以及细胞核中遗传DNA复制的启动。产品并填补这两点之间的空白，目前这些空白是黑匣子。我们主要分析了小鼠FM3A和Swiss3T3细胞的各种突变株。 1.对生长因子有不同要求的突变株的分离：通过对Swiss3T3细胞应用诱变剂，它们可以在0.2%血清存在下并且仅使用胰岛素生长。分离出一株只能用佛波二丁酸（PDBu）生长的突变株。2.对生长因子不同需求的突变株分析：仅用胰岛素即可生长的突变株，在无血清的情况下， EGF单独能够诱导DNA合成，并且这种诱导对百日咳毒素(IAP)敏感，这种诱导也被PDBu抑制，表明C激酶在该系统中没有观察到这种现象。单独在PDBu上生长的突变株3.DNA复制起始缺陷的温度敏感(ts)突变株的分离和鉴定：新从FM3A细胞中分离的突变株， tsFT5是一种S期突变株，具有在高温下减少DNA合成的特性。与我们实验室先前获得的ts突变株进行互补测试的结果表明，它是G2期突变株。它与 ts85 细胞属于同一互补组，tsFT5 的一个特征是在高温下，组蛋白 uH2A 在 DNA 合成下降之前稍微消失。当培养温度从高温转变为低温时，uH2A 在 DNA 合成重新开始之前出现，被认为是 DNA 复制启动所必需的，表明组蛋白 H2A 的泛素化参与了这一过程。 ，我们希望从这些突变体中分离出抑制突变体，并鉴定突变基因以供进一步分析。

项目成果

T. Eki: Exp. Cell Res.171. 24-36 (1987)

T. Eki：Exp。

Y. Ishimi: Eur. J. Biochem.162. 19-24 (1987)

Y. Ishimi：欧元。

H. Kurose: FEBS Lett.219. 375-379 (1987)

H. 黑濑：FEBS Lett.219。

T. Eki: Cancer Res.47. 5162-5170 (1987)

T. Eki：癌症研究 47。

M. Takahashi: Mol. Cell. Biol.

高桥先生：Mol。