相同的組換えの活性化点とその活性化機構の研究

同源重组激活点及其激活机制研究

基本信息

批准号：
62218010
负责人：
堀内嵩
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Special Project Research
财政年份：
1987
资助国家：
日本
起止时间：
1987 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-62218010/
关键词：
大腸菌相同的組換え RNaseH X配列複製終結点(terc)λファージ

项目摘要

従来より, 相同的組換えは染色体全体に均等にではなく, 局在化して起こることが観察されてきた. この現象に対する分子レベルでの実験的根拠としてλファージのX(カイ)配列がある. このX配列(5-GCTGGTGGT-3)はλファージ上でその前後約10KbのDNAの相同的組換えを活性化し, 極性を有することが知られている. 一方我々は最近大腸菌のRNaseH欠損変異株を解析する過程で, この株特異的に活性化する相同的組換え点の存在を示唆する以下の様な結果を得た. つまり染色体DNA断片中には, 自律複製能のないK^r_mDNA断片と結合し, 環状DNAとしてRNaseH欠損株にトランスフォーメーションした場合, それが染色体に組込まれたもの以外に, 逆に組換えで再度プラスミド状DNAとして回収されるもの(環状化活性)があることを見出した. 当初このDNA断片には自律複製能があると考え, 誤ってoriHと名付けたが, 分離した8種のoriHDNA断片のうち7種が複製終結点(terC)領域に位置していた. 本研究では, oriHDNAを含め, terc領域(〜300Kb)全域から, 20種以上のDNA断片を選択し, RNaseH欠損株中での「環状化活性」と同時にλファージ上での「X活性」の有無を調べ, 両者の関係を明らかにしようとした. その結果, 環状活性(+)の10種のうち1種を除き全てX活性(+)であったが, 環状化活性(-)のもの12種のうち, X活性(+)5種, (-)7種と分離した. またX活性(+)の8種のうち, 5種が極性を示し, 残りは両方向性を示した. さらに以上のX活性の程度は, 既知のそれとほぼ等しいこと, 宿主がRNaseH欠損株であろうとなかろうと, その活性に変化がないこと, 環状化活性(+)の1クローンの塩基配列を決定したところ, X配列が予想通りの向きで見出されたこと等から, 環状化活性点は, X配列又はX様配列でありRNaseH欠損下では, terc領域に比較的局在するそれらがなんらかの機構で活性化されると考えられる.

从过去，已经观察到同源重组甚至不等于整个染色体，但该现象的实验基础是λ噬菌体的X（KAI）序列。序列（5-GCTGTGTGT-3）激活了约10KB DNA在λ噬菌体上的同性恋重组，并且在分析过程中具有极性。在染色体DNA片段中，如果您连接到RNASEH缺乏库存作为圆形DNA，则没有自主性k^r_mDNA片段，除了掺入染色体的圆形DNA以外再次发现DNA的DNA ，从整个TERC区域（包括OrihDNA）中选择了20多个DNA片段，同时与RNASEH缺陷库存中的“循环活性”相同，在λfjury上进行了“ X活动”。澄清两者之间的关系。 x活性（+）和（ - ）的X活性（+），其余的是两个方向。 RNASEH缺陷应变，活性没有变化，并且已经确定了一个循环序列（+）的基本序列，因为发现X阵列如预期的那样，骑自行车的活动点在TERC区域相对局部RNASEH，RNASEH默认值在某种机制中被认为是活跃的。