造血多能幹細胞増殖因子を用いた骨髄性白血病発生機序の解析

造血多能干细胞生长因子分析髓系白血病发生机制

基本信息

批准号：
61015094
负责人：
渡辺陽之輔
金额：
$ 3.33万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1986
资助国家：
日本
起止时间：
1986 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

造血多能幹細胞増殖因子(HSGF)はヒト骨髄間質細胞株KM-102よりBurst Promoting activity(BPA)活性を指標として精製された。KM-102細胞の培養系から6Lの無血清培養濾液を採取した。この培養濾液を、5段階の分画(硫酸アンモニウム分画,陰イオン交換カラム,レクチンカラム,HPLCゲル濾過,逆相HPLC)をおこない、BPAの比活性を通常培養濾液の340000倍に高めた。この最終精製物はSDSポリアクリルアミドゲル電気泳動で約18000daltonの単一の広がったバンドとなり生物活性を伴っていた。この因子がBFUe由来コロニーのhalfmaximal growthを促す濃度は7pg/ml(3.9×【10^(-13)】M)で、現在までに報告されているBPA活性を有する因子の中で最も高い比活性を示した。本因子7pg/mlの濃度では0.3%軟寒天中でCFUc由来コロニーの形成は刺激されない。この因子120pg/mlの添加により、BFUe由来コロニー形成を40〜100%増加させることができ、これと同数のBFUe由来コロニーを得るのにエリスロポエチン添加量を0.5U/mlにまで減少させることができた。また、この因子はT細胞と壁付着細胞を除いた骨髄細胞の一週間の浮遊培養でコントロールに比し145%のG-CFUc、181%のGM-CFUc、264%のM-CFUc、393%のFo-CFUcの増加を促した。この結果は精製した因子が骨髄液体培養で多能性造血幹細胞の増殖分化を刺激し、分化の方向が決っている幹細胞の数の増加を引き起こす事を示唆する。この最終段階精製物を気相シークエンサーにてアミノ酸配列ではGM-CSFの配列に酷似していた。しかし、HSGFはCFUc分化への刺激作用が報告されているGM-CSFに比し弱く、また、極めて低濃度で未熟幹細胞の増殖分化を刺激する。また、この因子はヒト白血病細胞株(KG-1)の増殖を刺激する。以上より、更に、この物質の本態について検討の余地があり、今後、HSGFのレセプターの性状、シグナル伝達機構の解析をKG-1細胞を用いて行う予定である。

造血质干细胞增殖因子（HSGF）已被纯化为人类骨髓间质细胞KM-102的爆发活性（BPA）活性的指标。收集了来自KM-102细胞培养系统的6L无硫滤波器溶液。该培养膜是在硫酸铵，-ion交换柱，凝集素柱，HPLC凝胶过滤，反向相HPLC的五阶段分裂中进行的，将BPA的比率增加了3400,000亿倍的比率。。最终的纯化是SDS聚丙烯凝胶电泳，它是一个大约18000道尔顿的单个广泛带，并伴有生物学活性。该因素促进了源自BFUE的半XimaL生长，是7pg/ml（3.9×[10^（ - 13）M），迄今为止报告的BPA活性比例最高。在7 pg/mL的浓度中，在0.3％软琼脂中未刺激CFUC衍生的菌落的形成。通过添加该因子120pg/ml，可以将BFUE衍生的菌落的形成增加40％至100％，并且添加到0.5U/mL的红细胞生成素量可以减少到0.5U/ml，以获得相同数量的BFUE数量 - 衍生的殖民地。此外，与对照相比，该因子为145％的G-CFUC，181％GM-CFUC，264％M-CFUC，393％，M-CFUC，393％，393％，393％，393％，393％，393％的M与对照相比，CFUC促进了FO-CFUC的增加。该结果表明，纯化的因子刺激了通过骨髓液体培养的多能血液素质干细胞的生长分化，从而导致确定分化的干细胞数量增加。这个最后阶段与通风序列中氨基酸序列中的GM-CSF序列非常相似。然而，HSGF比GM-CSF弱，据报道，该HSGF刺激CFUC分化，并在极低浓度下刺激未成熟干细胞的生长分化。该因子刺激人白血病细胞的生长（KG-1）。从上面可以考虑这种物质的意图，并且将使用KG-1细胞分析HSGF受体和信号传递机制的分析。