脊髄損傷にによる神経ペプチド発現誘導と神経栄養因子による制御機構

脊髓损伤诱导神经肽表达及神经营养因子的控制机制

• 批准号: 08878143
• 负责人: 野口 光一
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Hyogo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 1997
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08878143/
• 关键词: 脊髄損傷; ダイノルフィン; in situハイブリダイゼーション法; 神経栄養因子; in situ ハイブリダイゼーション法

内因性オピオイドペプチドであるダイノルフィンは脊髄損傷後、脊髄で増加し二次的な神経傷害の病因になっていると考えられている。しかし、ダイノルフィンが脊髄のどの細胞に発現しているかはまだ確認されていない。そこで、脊髄損傷後のダイノルフィンの発現をラジオアイソトープ標識合成オリゴヌクレオチドプローブを用いたin situハイブリダイゼーション法により検討した。SDラットの下部胸椎を椎弓切除して脊髄に重錘を落とし、脊髄損傷モデルを作成した。ラットを損傷後4時間から1週間で潅流固定後、脊髄を取り出して組織切片を作成し、in situハイブリダイゼーション法を行った。ダイノルフィンmRNAの発現は損傷後4hより増加し始め、24h-48hでは損傷部位周辺の頭側及び尾側で著しく増加し、損傷部位頭側でのPPD mRNAの増加後の減少は麻痺の回復のみられる損傷後1wに一致していた。一方、損傷尾側でのPPD mRNAの増加の遷延はPPD mRNA発現ニューロンが、遠心性線維により影響をうけており、脊髄損傷によって脱抑制が起こり、activationされた可能性が考えらる。各個体の傾斜台角度とPPDmRNA陽性細胞数との相関関係をみると、両者は相関係数-0.848の負の相関を示し、脊髄損傷24h後の運動機能障害とPPDmRNAの発現量はよく相関していた。脊髄で増加したダイノルフィンは過去に報告された血流の減少や興奮性アミノ酸の増加や、リン脂質の加水分解、などのメカニズムを介して、脊髄に障害を与えていると考えられる。trkBmRNAの発現を同様の手法で検討した。trkBmRNAは損傷部位に限局して発現していた。BDNF (Brain derived neurotropic factor)を脊髄損傷前よりくも膜下に投与し、ダイノルフィンmRNA発現の変化を検索したが、特に発現の変化を観察されなかった。

强啡肽是一种内源性阿片肽，在脊髓损伤后在脊髓中增加，被认为在继发性神经损伤的发病机制中发挥作用。然而，目前尚未证实脊髓强啡肽在哪些细胞中表达。因此，我们使用放射性同位素标记的合成寡核苷酸探针通过原位杂交研究了脊髓损伤后强啡肽的表达。通过SD大鼠下胸椎椎板切除术并在脊髓上放置重物来建立脊髓损伤模型。伤后4小时至1周灌注固定大鼠，取出脊髓，制备组织切片，进行原位杂交。损伤后4 h开始强啡肽mRNA表达量开始增加，24 h~48 h损伤部位周围头侧和尾侧区域明显增加，而头侧区域PPD mRNA增加后下降。受伤部位仅因麻痹恢复而与受伤后1w一致。另一方面，损伤尾部 PPD mRNA 的长期增加表明表达 PPD mRNA 的神经元受到传出纤维的影响，并且可能被脊髓损伤引起的去抑制所激活。从倾斜台角度与每个个体PPD mRNA阳性细胞数量的相关性来看，两者呈负相关，相关系数为-0.848，脊髓损伤后24小时运动功能障碍和PPD mRNA表达水平相关性很好。脊髓中强啡肽的增加被认为会通过先前报道的机制损害脊髓，例如血流量减少、兴奋性氨基酸增加和磷脂水解。使用类似的方法检查 trkB mRNA 的表达。 trkBmRNA 在损伤部位局部表达。在脊髓损伤前鞘内注射 BDNF（脑源性神经营养因子）来寻找强啡肽 mRNA 表达的变化，但没有观察到表达的变化。

项目成果

Tachibana, T et al: "Dynorphin mRNA expression in dorsal horn neurons following traumatic spnal cord injury" J. Neurotrauma. (In press).

Tachibana, T 等人：“创伤性脊髓损伤后背角神经元中的强啡肽 mRNA 表达”J. Neurotrauma。