トランスポゾンによるイネ稔性回復遺伝子のタギングに関する研究

利用转座子标记水稻育性恢复基因的研究

• 批准号: 08760003
• 负责人: 千田 峰生
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Hirosaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08760003/
• 关键词: イネ; トランスポゾン; パーティクルガン; イネ; トランスポゾン; パーティクルガン

イネではトウモロコシ内在性のAc/Dsトランスポゾンが導入され、転移が確認されているもののAc/Dsの転移頻度が低いこと等により、未だ遺伝子がタギングされていないのが現状である。本研究ではイネの細胞質雄性不稔の稔性回復を支配する稔性回復遺伝子のタギングを目的にトウモロコシ内在性のトランスポゾンで転移頻度の高いことが報告されているMuトランスポゾンのイネへの導入を試みた。1.パーティクルガン法を用いたイネへの遺伝子導入ハイグロマイシン耐性遺伝子(hpt)をコーティングした金粒子をパーティクルガンによりイネ完熟種子に打ち込み、得られた種子カルスをハイグロマイシンで選抜して耐性カルスを得た。耐性カルスを再分化培地に移植し、得られた再分化イネについて、PCRおよびサザンハイブリダイゼーションにより、hptの導入を確認した。2.Muトランスポゾンを含むプラスミドの構築Muトランスポゾンの中で、転移頻度の高い非自律性トランスポゾンであるMulをhptおよびβ-グルクロニダーゼ遺伝子のプロモーター領域に挿入したプラスミドをそれぞれ構築した(プラスミド1,2)。次に、Muトランスポゾンのトランスポゼ-ス遺伝子と考えられているMuRAを含むプラスミドの構築を行った(プラスミド3)。Mulはトランスポゼ-スなしでは転移出来ない。したがって、プラスミド3とプラスミド1または2をイネに導入し、MulがMuRAによって転移した場合、ハイグロマイシン耐性カルスまたはGUS染色で着色するカルスが得られると考えられる。現在、これらの構築プラスミドをイネに導入し、Mulの転移を調査中である。

在水稻中，已经引入了内源性玉米AC/DS转座子，尽管已确认转移，但由于AC/DS转移的频率低，该基因尚未被标记。在这项研究中，我们试图引入MU转座子，据报道，这些转座子在玉米内源性转座子中被高度转移，以便标记控制水稻中细胞质雄性不育的恢复的生育恢复基因。 1。使用粒子枪法将涂有湿霉素耐药基因（HPT）涂有颗粒枪的基因转移到水稻中，使用颗粒枪植入水稻成熟的种子中，并使用湿霉素选择所得的种子愈伤组织以获得抗性愈伤组织。抗性愈伤组织被植入重新分化的培养基中，并确认由PCR和南部杂交确认所得的重分大米。 2。构建含有MU转座子的质粒在MU转座子中，质粒，其中将MUL（一种非自治转座子）插入了HPT和β-葡萄糖醛酸酶基因的启动子区域中的非自主转座子，分别构建了质粒（质粒1，2）。接下来，构建了一个含有MURA的质粒，该质粒被认为是MU转座子的转座酶基因（质粒3）。没有转座酶，MUL不能转移。因此，当将质粒3和质粒1或2引入大米并被穆拉（Mura）转移时，据信可以获得耐毒素的愈伤组织或带有GUS染色的愈伤组织。目前，这些构建的质粒已被引入大米，并正在研究MUL的转移。