カスパーゼの活性化を制御する因子とシグナル伝達系の解析

控制 caspase 激活的因素和信号转导系统分析

基本信息

批准号：
10163248
负责人：
桃井隆
金额：
$ 1.15万
依托单位：
National Center of Neurology and Psychiatry
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至 1999
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10163248/
关键词：
apoptosis Bcl-x caspase-3 Ced-3 Ced-9 neuronal development

项目摘要

線虫Ced-3の脊椎動物のホモローグであるカスパーゼはさまざまな細胞死の実行に関与していることが示唆されてきた。なかでもカスパーゼ3は発生過程のプログラム細胞死や神経変性疾患での神経細胞死に関与することが示唆されている。しかしながら、カスパーゼ3の活性化には、プロカスパーゼ3(p32)がp17とp12へとプロセッシングされることが必要なことから、個体切片上でのカスパーゼ3の活性化を検出することが困難であった。我々は、切断点特異的抗体を作成し、活性型カスパーゼ3(p20/17)のみを特異的に認識する抗体(活性化抗体)を作成した。活性化抗体とTUNEL法を用いることにより、神経系発達過程にみられるプログラム細胞死にはカスパーゼ3の活性化が関与していることを免疫組織学的に明らかにすることに成功した。今回、この研究を発展させ、プログラム細胞死におけるカスパーゼ3活性化の防御機構としての線虫Ced-9のホモローグであるBcl-Xの役割をBcl-Xノックアウトマウスを解析することにより明らかにすることができた。このことは線虫におけるCed-3とCed-9の関係が哺乳類のカスパーゼ3とBcl-xLの関係として進化をこえて保存されていることを示唆するものである。

Caspases 是秀丽隐杆线虫 Ced-3 的脊椎动物同源物，已被认为参与多种细胞死亡。其中，caspase-3被认为参与发育过程中的程序性细胞死亡和神经退行性疾病中的神经元细胞死亡。然而，caspase 3 的激活需要将 procaspase 3 (p32) 加工成 p17 和 p12，因此很难检测单个切片上 caspase 3 的激活。我们创建了一种断点特异性抗体（激活抗体），仅特异性识别激活的 caspase 3 (p20/17)。通过使用激活抗体和 TUNEL 方法，我们成功地通过免疫组织学证明了 caspase-3 的激活参与了神经系统发育过程中观察到的程序性细胞死亡。在这里，我们将扩展这项研究，并通过分析 Bcl-X 敲除小鼠来阐明 Bcl-X（线虫 Ced-9 的同源物）作为针对程序性细胞死亡中 caspase 3 激活的保护机制的作用。这表明线虫中 Ced-3 和 Ced-9 之间的关系在整个进化过程中是保守的，哺乳动物中 caspase-3 和 Bcl-xL 之间的关系也是如此。