歯原性上皮細胞におけるNGF-p75シグナルによる細胞増殖制御機構の解明

阐明牙源性上皮细胞中 NGF-p75 信号的细胞增殖控制机制

• 批准号: 16K20633
• 负责人: 小野 真理子
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2016
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2016-04-01 至 2018-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16K20633/
• 关键词: 歯原性上皮細胞; 神経栄養因子; 神経成長因子; NGF

我々はこれまで、歯原性上皮細胞において、神経栄養因子のうちNGFがその低親和性受容体p75を介し細胞増殖シグナルを伝達していることを明らかにしてきた。このシグナル伝達機構の詳細な解析を行うために、まず完全長p75(pEF1/p75)およびp75細胞内ドメインを欠失させた発現ベクター(pEF1/p75-ΔICD)を作製、歯原性上皮細胞株（SF2細胞）に遺伝子導入を行った。これらの過剰発現細胞おいてそれぞれの細胞増殖を比較したところ、完全長p75過剰発現細胞においては有意に細胞増殖が誘導された。一方でp75-ΔICD過剰発現細胞では細胞増殖促進はみられなかった。次に、NGFのp75下流でのシグナル伝達経路について解析を行った。ウェスタンブロット法による解析の結果、ERK1/2のリン酸化が強く認められた。これより、SF2細胞にERK1/2の上流分子であるMEKの阻害剤U0126による処理を行い、増殖に与える影響を検討したところ、阻害剤の濃度依存的にNGFによる細胞増殖が抑制された。以上の結果より、NGFはp75に結合し、その下流においてERK1/2をリン酸化することによる歯原性上皮細胞の増殖シグナルを伝達していることが示唆された。これまで、歯原性上皮細胞においては、NGFと同じ神経栄養因子ファミリーに属するNT-4が高親和性受容体TrkBに結合後、その下流でERK1/2をリン酸化し細胞の分化を促進することが明らかとなっている。こちらのシグナルとの比較および細胞動態に与える影響、またNGF-p75-ERK1/2のシグナル経路のさらに詳細な解析を進めているところである。

我们先前已经表明，在神经营养因素中，NGF在鼻上皮细胞中，通过其低亲和力受体p75传递细胞增殖信号。为了对该信号传导机制进行详细分析，首先制备了全长P75（PEF1/P75）和P75细胞内结构域的表达载体（PEF1/P75-ΔICD），并将基因转移在八十遗传学上的细胞系（SF2细胞）中进行。当每个过表达细胞中的每一个比较细胞增殖时，在全长P75过表达细胞中会显着诱导细胞增殖。另一方面，在P75-ΔICD过表达的细胞中没有促进细胞增殖。接下来，分析了NGF P75下游的信号通路。 Western印迹分析的结果表明ERK1/2的强磷酸化。由此，用MEK的抑制剂U0126（ERK1/2的上游分子）处理SF2细胞，并研究了对增殖的影响，并以NGF的细胞增殖以抑制剂的浓度依赖性抑制。上述结果表明，NGF与p75结合，并通过下游ERK1/2的磷酸化来传递鼻源性上皮细胞的增殖信号。到目前为止，据透露，在源源不断的上皮细胞中，属于与NGF相同的神经营养因子家族的NT-4与高亲和力受体TRKB结合，然后磷酸化ERK1/2下游，从而促进细胞分化。目前，我们正在对信号比较与该信号，其对细胞动力学的影响以及NGF-P75-ERK1/2的信号途径进行更详细的分析。