歯原性上皮細胞におけるNGF-p75シグナルによる細胞増殖制御機構の解明

阐明牙源性上皮细胞中 NGF-p75 信号的细胞增殖控制机制

• 批准号: 16K20633
• 负责人: 小野 真理子
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2016
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2016-04-01 至 2018-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16K20633/
• 关键词: 歯原性上皮細胞; 神経栄養因子; 神経成長因子; NGF

我々はこれまで、歯原性上皮細胞において、神経栄養因子のうちNGFがその低親和性受容体p75を介し細胞増殖シグナルを伝達していることを明らかにしてきた。このシグナル伝達機構の詳細な解析を行うために、まず完全長p75(pEF1/p75)およびp75細胞内ドメインを欠失させた発現ベクター(pEF1/p75-ΔICD)を作製、歯原性上皮細胞株（SF2細胞）に遺伝子導入を行った。これらの過剰発現細胞おいてそれぞれの細胞増殖を比較したところ、完全長p75過剰発現細胞においては有意に細胞増殖が誘導された。一方でp75-ΔICD過剰発現細胞では細胞増殖促進はみられなかった。次に、NGFのp75下流でのシグナル伝達経路について解析を行った。ウェスタンブロット法による解析の結果、ERK1/2のリン酸化が強く認められた。これより、SF2細胞にERK1/2の上流分子であるMEKの阻害剤U0126による処理を行い、増殖に与える影響を検討したところ、阻害剤の濃度依存的にNGFによる細胞増殖が抑制された。以上の結果より、NGFはp75に結合し、その下流においてERK1/2をリン酸化することによる歯原性上皮細胞の増殖シグナルを伝達していることが示唆された。これまで、歯原性上皮細胞においては、NGFと同じ神経栄養因子ファミリーに属するNT-4が高親和性受容体TrkBに結合後、その下流でERK1/2をリン酸化し細胞の分化を促進することが明らかとなっている。こちらのシグナルとの比較および細胞動態に与える影響、またNGF-p75-ERK1/2のシグナル経路のさらに詳細な解析を進めているところである。

我们之前已经证明，神经营养因子之一的 NGF 通过其低亲和力受体 p75 在牙源性上皮细胞中传递细胞增殖信号。为了对该信号转导机制进行详细分析，我们首先创建了全长p75（pEF1/p75）和删除了p75胞内结构域的表达载体（pEF1/p75-ΔICD），并使用了牙源性上皮细胞将该基因引入(SF2细胞)。当比较这些过表达细胞的细胞增殖时，过表达全长p75的细胞显着诱导了细胞增殖。另一方面，在过表达p75-ΔICD的细胞中没有观察到细胞增殖的促进。接下来，我们分析了NGF p75下游的信号转导通路。 Western blotting分析的结果，观察到ERK1/2的强磷酸化。在此基础上，用ERK1/2上游分子MEK抑制剂U0126处理SF2细胞，并检查其对增殖的影响，结果发现NGF诱导的细胞增殖以浓度依赖性方式被抑制。抑制剂。上述结果提示NGF与p75结合，通过磷酸化下游ERK1/2向牙源性上皮细胞传递增殖信号。此前，在牙源性上皮细胞中，与NGF属于同一神经营养因子家族的NT-4与高亲和力受体TrkB结合，然后磷酸化下游的ERK1/2，促进细胞分化。我们目前正在对该信号、其对细胞动力学的影响进行比较，并对 NGF-p75-ERK1/2 信号通路进行更详细的分析。