ゴナドトロピン反応性獲得機構の解明とヒト卵胞培養への応用

促性腺激素反应性获得机制的阐明及其在人类卵泡培养中的应用

• 批准号: 16K20186
• 负责人: 中村 智子
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2016
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2016-04-01 至 2017-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16K20186/
• 关键词: 黄体形成ホルモンレセプター; エピジェネティクス; 卵胞発育; 顆粒膜細胞; 細胞・組織

妊孕性の高い良質な卵を得るためには卵胞構成要素として重要な顆粒膜細胞の正常な発育が必須である。顆粒膜細胞の発育過程の中でも、黄体形成ホルモンレセプター（LHR）の発現は、顆粒膜細胞が卵胞内で支持・栄養する卵の予後に大きく影響する。これまでLHRの発現制御はホルモンやエピジェネティックな機序によると報告されているがヒト顆粒膜細胞での詳細は解明されていない。我々は、卵胞発育過程におけるエピジェネティックな修飾やホルモンによるLHR発現の制御を調べた。不死化ヒト非黄体化顆粒膜細胞株(HGrC1)を用い、5-azacytdine C (5Aza-C)、trichostatin A (TSA)、estradiolとFSHを添加しLHR mRNA発現、ヒストン修飾やDNAメチル化、転写因子の結合を検討した。LHR mRNAの発現は5Aza-CとTSAに対し濃度依存性に上昇し、同時添加にて相乗的に増強した。HGrC1はTSAを共添加した場合にのみestradiolとFSHに反応した。TSAはLHRプロモーター領域のヒストンのアセチル化を亢進した。また同一ヒト卵巣内で、一次卵胞よりも胞状卵胞及び黄体にて、LHRプロモーター領域は脱メチル化されていた。さらにTSAと5Aza-C添加により、転写因子Sp1とPC4のLHRプロモーター領域への結合は増強した。これらの結果からヒト顆粒膜細胞のLHR発現において、estradiolやFHSへの反応性を獲得するにはLHRプロモーター領域に適切なヒストン修飾が必要であること、また一次卵胞以降の卵胞発育過程で脱メチル化が起きることが示唆された。DNAメチル化、ヒストン修飾やホルモンによる制御は、卵胞発育過程において異なる段階で作用し、これらの制御の緻密な組み合わせは、卵胞の正常な発育と早期卵巣機能不全の防止に寄与していると考えられた。

为了获得高受精率的优质卵子，作为卵泡重要组成部分的颗粒细胞的正常发育至关重要。在颗粒细胞的发育过程中，黄体生成素受体（LHR）的表达对卵泡内颗粒细胞支持和滋养的卵子的预后具有显着影响。迄今为止，已有报道称LHR表达受激素和表观遗传机制控制，但人类颗粒细胞中的细节尚未阐明。我们研究了卵泡发育过程中表观遗传修饰和激素对 LHR 表达的调节。使用永生化人非黄素化颗粒细胞系 (HGrC1)，我们添加 5-氮杂胞苷 C (5Aza-C)、曲古抑菌素 A (TSA)、雌二醇和 FSH 来表达 LHR mRNA、组蛋白修饰、DNA 甲基化和转录。因素的组合进行了研究。 LHR mRNA 的表达响应 5Aza-C 和 TSA 以浓度依赖性方式增加，并且通过同时添加而协同增强。仅当同时添加 TSA 时，HGrC1 才会与雌二醇和 FSH 发生反应。 TSA 增强了 LHR 启动子区域的组蛋白乙酰化。此外，在同一人类卵巢内，窦卵泡和黄体中的 LHR 启动子区域比初级卵泡中的去甲基化程度更高。此外，添加 TSA 和 5Aza-C 增强了转录因子 Sp1 和 PC4 与 LHR 启动子区域的结合。这些结果表明，当在人颗粒细胞中表达LHR时，为了获得对雌二醇和FHS的反应性，LHR启动子区域需要适当的组蛋白修饰，并且表明在从初级卵泡开始的卵泡发育过程中发生了去甲基化。会发生。 DNA甲基化、组蛋白修饰和激素调节作用于卵泡发育过程的不同阶段，这些调节的精确组合被认为有助于卵泡的正常发育和预防早期卵巢功能障碍。

项目成果

ヒト顆粒膜細胞におけるゴナドトロピンレセプターの発現制御

人颗粒细胞促性腺激素受体表达的调节

• 发表时间: 2017
• 作者: 清水顕;岩瀬明;Nguyen Xuan Phuoc;Ganieva Umida;Qin Ying;仲西菜月;笠原幸代;永井孝;邨瀬智彦;石田千晴;加藤奈緒;大須賀智子;中村智子;滝川幸子;後藤真紀;吉川史隆
• 通讯作者: 吉川史隆