神経栄養因子高発現間葉系幹細胞の細胞移植によるALSおよび虚血性脳卒中治療の試み

尝试通过高表达神经营养因子的间充质干细胞的细胞移植治疗ALS和缺血性中风

• 批准号: 16K20011
• 负责人: 中西 真実
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Tottori University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2016
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2016-04-01 至 2018-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16K20011/
• 关键词: 筋萎縮性側索硬化症; 細胞移植; ヒト人工染色体; 間葉系幹細胞; ルシフェラーゼ; 組織工学; ALS; 神経変性疾患; 幹細胞移植; 人工染色体; 虚血性脳卒中; 神経栄養因子; 筋萎縮性側索硬化症; 細胞移植; ヒト人工染色体; 間葉系幹細胞; ルシフェラーゼ; 組織工学; ALS; 神経変性疾患; 幹細胞移植; 人工染色体; 虚血性脳卒中; 神経栄養因子

・ALSモデルマウスへのHAC-MSC細胞シート移植と臨床評価前年度に行った100日齢ALSモデルマウスへのHAC-MSC細胞シート移植について、追加の解析を行った。生存期間中央値をカットオフ値とし、急速に症状が悪化に死亡する群（急速進行群）と緩慢に症状が悪化に死亡する群（緩慢進行群）に細分した場合、急速進行群の生存率は群間で有意に異なった（治療群：対照群= 145.4±1.4対139.2±1.2）。 HAC-MSCシート移植の治療ウインドウは短く、治療効果は限定的であることが示唆された。・移植片の分化と宿主への影響の評価in vivo 光イメージングを用いて，ホストマウスを生かしたまま移植片由来の生物発光を計測し、細胞シート移植と脳室投与とを比較した。シート移植群では、移植後0日目から7日目にかけて、シグナルが6倍近く増加した。一方、HAC-MSCを第四脳室を介して注入した群では、シグナルは移植後3日にかけて急激に減少した。組織学的評価において、移植細胞は皮質表面に層状に確認され、深部への遊走は見られなかった。細胞シート移植法を用いることで、ドナー細胞を長期間に渡って大脳皮質表層に保持でき、拡散を防げることが示唆された。・細胞シートの条件付き事前培養細胞シートの生着期間を延ばすために、細胞シートの条件付き事前培養（Preconditioning）二群（低酸素かつ低栄養の状態で事前培養した群（貧環境群）、血管内皮前駆細胞とHAC-MSCを混合培養した群（混合培養群））と通常の細胞シート移植群とを比較した。移植後のin vivo光イメージングシグナルの推移を調べた。その結果、貧環境群は他二群に比べて移植後7日目にシグナルが高くなる傾向がみられたものの、有意差には至らなかった。また三群いずれも移植後14日目でシグナルはほぼ消失した。

- 对HAC-MSC细胞板植入ALS模型小鼠进行了其他分析，并将HAC-MSC细胞板植入到上一年的临床评估中进行的100天大的ALS模型小鼠。当中位生存率用作临界值并细分为症状迅速恶化的组（快速进行性逐渐进行），并且症状缓慢恶化（缓慢进行性群体）时，快速发展组的存活率显着差异（治疗组：对照组：对照组= 145.4±1.4±1.4 vs.139.2±1.2）。 HAC-MSC板植入的治疗窗口很短，表明治疗效果受到限制。 - 使用体内光学成像对移植物分化和宿主效应进行评估，在宿主小鼠保持生存的同时，测量了移植物的生物发光，并比较了细胞片移植和心室给药。在植入组中，植入后0到7天之间信号增加了近六倍。另一方面，在植入后3天内，在第四个心室注入HAC-MSC的组中，信号急剧下降。组织学评估表明，植入的细胞分层在皮质表面，未观察到深层迁移。已经提出，使用细胞板植入方法可以使供体细胞长时间保留在大脑皮层的表面层中，从而防止扩散。细胞表的有条件预培养以扩大细胞表的植入期，两组有条件的细胞表（在缺氧和营养不良中预培养的组（在贫困环境中），比较了血管内皮祖细胞和HAC-MSC的血管内皮祖细胞和HAC-MSC的组（混合培养物中的HAC-MSC）的组被混合与使用的单元组相结合。研究了植入后体内光学成像信号的趋势。结果，尽管与其他两组相比，在移植后的第7天有较差的环境组有更高的信号，但这并没有导致显着差异。此外，植入后14天，这三组的信号几乎消失了。