人工染色体導入技術を用いた薬物代謝酵素誘導を経時的評価可能なシステムの開発

使用人工染色体引入技术开发可以评估药物代谢酶随时间诱导的系统

基本信息

批准号：
16K18942
负责人：
佐藤大介
金额：
$ 2.58万
依托单位：
Tottori University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2016
资助国家：
日本
起止时间：
2016-04-01 至 2018-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本検討課題では、導入した人工染色体を保持する肝がん由来細胞株（HepG2細胞、JHH5細胞、HuH7細胞）に、既知の代謝酵素誘導薬剤を処置してから48時間後の人工染色体に搭載したCYPプロモーターによって調節される発光タンパク質の発光量、および遺伝子発現量を定量し、各化合物間および遺伝子発現量-発光量間で比較検討した。各細胞株に、CYP3Aを誘導することが報告されている5種類の薬剤を添加したときの、人工染色体に搭載されたCluc遺伝子および細胞ホスト由来染色体に基づくCYP3A4遺伝子の発現誘導の比較したとき、いずれの化合物においても、CYP3A4遺伝子の発現誘導に伴い、Cluc遺伝子の発現が上昇した。このことは、我々が作製した人工染色体コンストラクトは肝がん由来細胞株において誘導性化合物によって特異的に惹起される代謝酵素誘導を反映できることを示唆した。次に、Cluc遺伝子発現変化が、Clucの発光活性にまで影響するかについて検証した。さきほどまでと同様にCYP3Aを誘導することが報告されている5種類の薬剤を添加した後、Cluc活性について評価したところ、いずれの化合物群においても、Cluc遺伝子発現の上昇に伴い、Cluc活性が上昇することが認められた。以上の結果から、我々の作製した人工染色体コンストラクトは、肝細胞において化合物特異的な代謝酵素誘導をルシフェラーゼ活性にて評価することを可能にしたことを示した。

在这项研究中，我们用已知的代谢酶诱导药物处理携带引入的人工染色体的肝癌来源的细胞系（HepG2细胞、JHH5细胞、HuH7细胞），48小时后，人工染色体被加载到人工染色体上。对受CYP启动子调节的发光蛋白的发光量和基因表达量进行定量并在各化合物之间以及基因表达量和发光量之间进行比较。当将已报道的诱导 CYP3A 的五种药物添加到每个细胞系中时，在所有化合物中比较了人工染色体上携带的 Cluc 基因和基于细胞宿主来源的染色体的 CYP3A4 基因的表达诱导。 Cluc基因表达随着CYP3A4基因表达的诱导而增加。这表明我们创建的人工染色体构建体可以反映代谢酶的诱导，特别是由肝癌衍生细胞系中的诱导化合物引起的。接下来，我们验证了Cluc基因表达的变化是否影响Cluc的发光活性。与之前一样，当我们在添加五种已报道诱导 CYP3A 的药物后评估 Cluc 活性时，我们发现在所有化合物组中，Cluc 活性随着 Cluc 基因表达的增加而增加。上述结果表明，我们创建的人工染色体构建体使得可以利用荧光素酶活性来评估肝细胞中化合物特异性代谢酶的诱导。

项目成果

期刊论文数量（6）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Intestinal modeling of CYP3A4 induction using double humanized mice of PXR/SXR and CYP3As generated by chromosome engineering technology

利用染色体工程技术产生的PXR/SXR和CYP3As双人源化小鼠进行CYP3A4诱导的肠道模型

DOI：
发表时间：
2016
期刊：
影响因子：
0
作者：
戸子臺泰光;薬師寺文華;仙谷徹;勝山彬;市川聡;佐藤大介
通讯作者：
佐藤大介

Construction of hepatocytes model stable-expressing CYPs for pharmacokinetics and toxicokinetics using Artificial Chromosome Technology

利用人工染色体技术构建稳定表达 CYP 的肝细胞模型用于药代动力学和毒代动力学

DOI：
发表时间：
2016
期刊：
影响因子：
0
作者：
大谷祐基;米澤淳;今井哲司;津田真弘;池見泰明;大村友博;中川俊作;中川貴之;松原和夫;岩藤悟
通讯作者：
岩藤悟

Evaluation of In Vivo CYP3As Induction Using a CYP3A/PXR Humanized Mouse to Predict Intestinal First-pass Metabolism

使用 CYP3A/PXR 人源化小鼠评估体内 CYP3As 诱导以预测肠道首过代谢

DOI：
发表时间：
2017
期刊：
影响因子：
0
作者：
Daisuke Satoh;Satoru Iwado;Kaoru Kobayashi;Jiro Kuze;Takushi Yamamoto;Katsuhide Igarashi;Satoshi Kitajima;Jun Kanno;Mitsuhiko Osaki;Kan Chiba;Mitsuo Oshimura;Yasuhiro Kazuki
通讯作者：
Yasuhiro Kazuki

Establishment of a novel hepatocyte model that expresses four cytochrome P450 genes stably via mammalian-derived artificial chromosome for pharmacokinetics and toxicity studies