酸性分子シャペロンによるウイルスRNPの機能調節

酸性分子伴侣对病毒 RNP 的功能调节

• 批准号: 15030204
• 负责人: 竹内 薫
• 金额: $ 4.1万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15030204/
• 关键词: インフルエンザウイルス; RNAポリメラーゼ; 酸性分子シャペロン; RAF-I; Hsp90; 分子集合; RNA転写・複製; ウイルス; 核酸; 蛋白質相互作用; シャペロン; 核酸擬態; インフルエンザウイルス; RNAポリメラーゼ; 酸性分子シャペロン; RAF-I; Hsp90; 分子集合; RNA転写・複製; ウイルス; 核酸; 蛋白質相互作用; シャペロン; 核酸擬態

インフルエンザウイルスRNA-タンパク質(RNP)複合体を用いた試験管内ウイルスRNA合成系の解体と再構成により我々が同定した、酸性分子シャペロン(RAF-I/Hsp90)について解析を進めた。細胞質に存在するRAF-I/Hsp90はインフルエンザウイルス感染によって核内に移行することが知られているが、その意義については明らかではない。そこで、RAF-I/Hsp90のウイルス増殖における役割を解明するため、インフルエンザウイルスポリメラーゼの各サブユニット(PB2,PB1,PA)をcDNAから個別にあるいは同時に発現させRAF-I/Hsp90との相互作用を調べた。RAF-I/Hsp90はポリメラーゼのうちPAが結合する前のPB2、PB1サブユニットおよびサブコンプレックスに結合することが示された。我々は、RAF-I/Hsp90はポリメラーゼ各サブユニットをアッセンブリーさせる調節因子ではないかと考えている。この仮説を裏付けるように、感染細胞内において新規合成直後のサブユニットとRAF-I/Hsp90間には強い相互作用が認められたが、時間を追うごとに結合が解離していく様子が観察された。さらに、PB2のRAF-I/Hsp90との相互作用に重要な領域を細胞に発現させると、インフルエンザウイルスの増殖を完全に抑制することが見出された。PB2のこの領域はドミナントネガティブ体として働きうることを示しており、PB2とRAF-I/Hsp90との相互作用の重要性を示している。

我们通过使用流感病毒RNA蛋白（RNP）复合物来拆卸和重建体外病毒RNA合成系统来分析酸性分子伴侣（RAF-I/HSP90）。尽管众所周知，存在于细胞质中的RAF-I/HSP90在流感病毒感染后转移到细胞核中，但其重要性尚不清楚。因此，为了阐明RAF-I/HSP90在病毒增殖中的作用，从cDNA单独或同时表达了流感病毒聚合酶（PB2，PB1，PA）的每个亚基，以研究与RAF-I/HSP90的相互作用。 RAF-I/HSP90已显示与PA结合之前的聚合酶的PB2，PB2亚基和子复合物结合。我们认为RAF-I/HSP90是组装聚合酶亚基的调节因素。为了支持这一假设，在被感染的细胞中新合成后的亚基与RAF-I/HSP90之间观察到了强烈的相互作用，但是观察到结合与时间分离。此外，发现表达对PB2与RAF-I/HSP90相互作用重要的区域在细胞中完全抑制了流感病毒的扩散。 PB2的该区域表明，它可以充当主要的负面体，表明PB2与RAF-I/HSP90之间相互作用的重要性。