Notch-βペプチドを孤発性アルツハイマー病マーカーとして開発できるか

Notch-β肽能否开发为散发性阿尔茨海默病标志物？

• 批准号: 15016069
• 负责人: 大河内 正康
• 金额: $ 3.33万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15016069/
• 关键词: アルツハイマー病; プレセニリン; γセクレターゼ; Notchシグナル伝達; アミロイドβ蛋白; Notch-1-β peptide

我々はNotch-1蛋白由来の新規ペプチド(Notch beta-peptide;N-beta)がgamma-secretaseメカニズムにより細胞外に分泌されることを明らかにした。プレセニリンの病原性突然変異体はA-betaのカルボキシル末端を延長する。言い換えると変異型プレセニリンはSite-4切断の正確さに同様の影響を及ぼす。したがって、プレセニリン変異体は2つの全く異なる基質(Notch/betaAPP)の同じような部位(S4/gamma40)での切断の正確さに向じような影響(切断をよりカルボキシル末端側へずらす)を示す。他のプレセニリン依存性蛋白分解の基質であるCD44でも膜内蛋白分解の結果A-beta/N-betaのようなA-beta-likeペプチドが分泌されることを考慮すると、A-beta-likeペプチドの分子種(長さ)・量はγセクレターゼ活性を反映していると考えられる。そこで、集積・蓄積しやすい性質を持つA-betaペプチドの代わりにN-betaなどのA-beta-likeペプチドを測定することで、γセクレターゼがA-betaをどれくらい産生しているか?、A-beta42の産生量は増加している?を推測できるのではないかと考えた。human型およびmouse型Noch-betaペプチドをA-beta抗体を作成するときのように試験管内で培養したあとウサギ等に免疫したがいずれの場合も抗体価が上昇しなかった。この原因を(1)種が近すぎるために免疫寛容が働いている、(2)Noch-betaはA-betaと異なり凝集しないためハプテン作用しか持たない、と考えた。様々な実験を繰り返し最終的にmouse型Notch-beta抗血清を得た。この抗体を用いて培養細胞から放出されるタグのついていない野生型Notch-betaを認識することに成功した。また、この野生型Notch-betaの質量分析解析の結果から、そのN-、C-末端を決定した。このことから、Notch-1はシグナル伝達の過程でPS/γ-secretaseによるdual-intramembranous cleavageによりNotch-1-beta peptideを放出していることが最終的に証明された。

我们已经揭示了一种源自Notch-1蛋白（Notchβ-肽； N-β）的新型肽（N-BETA）被γ-分泌酶机制细胞内分泌。 Presenilin的致病突变体扩展了A-Beta的羧基末端。换句话说，突变型寄生虫对位点4裂解的准确性具有相似的影响。因此，在两个完全不同的底物（Notch/betaapp）的同一位点（S4/GAMMA40）（Notch/BetaApp）的同一位点（S4/GAMMA40）上，Presenilin突变体在同一位点（S4/GAMMA40）表现出更大的牵引效果（对羧基末端的分流）。考虑到CD44是依赖早期蛋白依赖性蛋白水解的另一种底物，分泌A-beta样肽，例如A-beta/n-beta，由于膜内蛋白水解的结果，人们认为分子种（长度）和类似A-beta的肽的量反映了粘膜凝胶酶的含量。因此，我们认为，通过测量具有容易积累和积累的特性的A-beta样肽，例如N-beta，我们可以推断出γ-分泌酶产生了多少A-beta以及多少A-Beta42产生正在增加。人型和小鼠型NOCH-β肽在试管中被培养，就像制备A-β抗体，然后是免疫的兔子等，但在任何一种情况下，抗体滴度都没有增加。我们认为（1）免疫耐受性是活跃的，因为该物种太近了，并且（2）与A-beta不同的Noch-Beta不会汇总，并且只有触觉效果。重复各种实验，并最终获得小鼠型Notch-beta抗血清。该抗体被用来成功识别从培养细胞释放的未标记的野生型Notch-beta。此外，从质谱分析的结果确定了这种野生型notch-beta的N-和C末端。这证明Notch-1在信号转导期间通过PS/γ-分泌酶通过双重感染裂解来释放Notch-1-beta辣椒。

项目成果

Okochi, M., Fukumori, A., et al.: "Alzheimer's γ-secretase mechanism produces Amyloid-β-protein like peptides simultaneously with release of intracellular signaling fragments"Molecular Neurobiology of Alzheimer Disease and Related Disorders, Karger Press.

Okochi, M.、Fukumori, A. 等人：“阿尔茨海默氏症的 γ-分泌酶机制在释放细胞内信号片段的同时产生淀粉样蛋白-β-蛋白样肽”《阿尔茨海默病和相关疾病的分子神经生物学》，Karger Press。

大河内正康, 武田雅俊: "アルツハイマー病・アミロイドβ蛋白を生成するメカニズムはいくつかの他のペプチドを同時に生成している-新規Notch-βペプチドの発見および、そのアルツハイマー病予期診断マーカーとしての応用の可能性について"精神神経学雑誌. 105. 43-46 (2003)

Masayasu Okochi、Masatoshi Takeda：“产生阿尔茨海默病β淀粉样蛋白的机制同时产生几种其他肽——发现一种新型Notch-β肽及其作为阿尔茨海默病预测诊断标志物的应用”关于这种可能性《精神病学杂志》和神经病学。 105. 43-46 (2003)

大河内正康, 武田雅俊: "βアミロイドとは何か? 段階的膜内蛋白分解を伴うシグナル伝達の結果放出される小さなペプチド群について"日本痴呆学会誌. 17. 36-45 (2003)

Masayasu Okochi、Masatoshi Takeda：“什么是 β-淀粉样蛋白？关于由于信号转导伴随逐步膜内蛋白水解而释放的一组小肽”日本痴呆症协会杂志 17. 36-45 (2003)。

Okochi, M., Takeda, M.: "Presenilins mediate a dual intramembranous γ-secretase cleavage of Notch-1"Annual Report of Osaka University-Academic Acievement 2002-2003,22 Graphics Selections. 63 (2004)

Okochi, M., Takeda, M.：“早老素介导 Notch-1 的双膜内 γ-分泌酶裂解”大阪大学学术成果年度报告 2002-2003，22 图形选集 63 (2004)。