カルシウムによる成長円錐運動制御機構の解析

钙生长锥运动控制机制分析

基本信息

批准号：
15016017
负责人：
石川良樹
金额：
$ 3.58万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15016017/
关键词：
アクチンミオシンファシン成長円錐フィロポディア

项目摘要

ファシン、およびその活性を調節するカルシウム感受性アクチン結合蛋白質カルデスモン・トロポミオシンの生態観察を行い、これら蛋白質の成長円錐における役割を探った。EGFP-ファシンの遺伝子導入をNg108-15細胞に行い、この蛋白質が成長円錐フィロポディアに局在する事を確認した。さらに、生体観察を行ったところ、ファシンがレトログレード・フローに乗ってフィロポディア先端から後方へと移動する事を見いだした。このことは、アクチン/ファシンの束が一体となって前方から後方へ輸送される事を示唆している。ちなみに、この結果はアクチン以外の蛋白質のレトログレード・フローを観察した初の例である。また、ファシンはC-kinaseによってリン酸化され、アクチン結合能を失う事が知られている。そこで、リン酸化部位をAに置き換えた疑似非リン酸化型、Dに置き換えた疑似リン酔化型変異体を作成して同様の観察を行った。非リン酸化型ファシンではフィロポディアが発達し、アクチン繊維の上にしっかりと乗っていたのに対し、疑似リン酸化型はフィロポディア上に局在していなかった。以上の事から、ファシンのリン酸化がフィロポディア動態と密接に関与している可能性を示唆出来た。カルデスモンとトロポミオシンは協調してファシンの束化活性を阻害し、Ca2+/calmodulinにより、阻害が解除される。EGFP-カルデスモンを過剰発現させたところ、カルデスモンもレトログレード・フローに乗ってフィロポディア先端から後方へと移動した。現在、この細胞、及びEGFP-トロポミオシンとEGFP-カルデスモンの共発現細胞において、フィロポディアの形態観察を行っているところである。

我们对fasine和钙敏感的肌动蛋白结合蛋白Caldesmon Tropomyosin进行了生态观察，该蛋白质调节其活性，并探索了这些蛋白质在生长锥中的作用。 EGFP-FASIN的基因转移在NG108-15细胞中进行，并证实该蛋白质定位于生长锥细胞。此外，还进行了生物学观察，发现Fascin从逆行流动的系统端向后移动。这表明肌动蛋白/雕像束被整合到从前到后部的运输。顺便说一句，该结果是观察肌动蛋白以外的蛋白质逆行流动的第一个例子。众所周知，Fascin被C-激酶磷酸化并失去其肌动蛋白结合能力。因此，创建了伪非磷酸化的突变体，其中磷酸化位点被A代替，并用D替换了伪磷酸化的突变体D，并进行了类似的观察结果。在非磷酸化的筋膜中，天嗜性蛋白质稳定在肌动蛋白纤维上，而伪磷酸化的形式未定位在今天的细胞蛋白纤维上。从以上，可以提出fast蛋白磷酸化可能与细胞动力学密切相关。 Caldesmon和Tropomyosin合作以抑制Fascin的捆绑活性，而Ca2+/钙调蛋白可以禁用抑制作用。当EGFP-Caldesmon过表达时，Caldesmon也从逆行流的系统端向后移动。目前，在该细胞和共表达EGFP - 胶质球素和EGFP-Caldesmon的细胞中观察到了天植物的形态。