カリクレインにより血中で生成されるPGI_2産生促進ペプチドの分離同定と作用機構

激肽释放酶在血液中产生的PGI_2促产肽的鉴定及其作用机制

基本信息

批准号：
63637502
负责人：
室田誠逸
金额：
$ 0.9万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-63637502/
关键词：
プロスタサイクリン PGI_2 血管内皮細胞カリクレイン

项目摘要

プロスタサイクリン(PGI_2)は、血管内皮細胞が産生するアラキドン酸代謝物で、きわめて強い血小板凝集抑制作用をもっている。これまでの多くの研究から、PGI_2は内因性の動脈硬化予防因子であると考えられる。生体内におけるPGI_2の生成が如何なる機序で調節されているのかを知るために、血管内皮細胞の培養系を用いて検討を行った。ウシ頚動脈由来の内皮細胞を10%の仔胎児血清を含む培養液で培養した。この培養系にブラジキニンやヒスタミン、トロンビンなどを添加すると、血管内皮細胞が刺激され、ホスホリパーゼA_2の活性化、ついで細胞膜からアラキドン酸の遊離が起こり、その結果としてPGI_2産生が促進される。カリクレインは血中に存在するキニノーゲンに働いてブラジキニンを産生させる酵素であるが、薬剤として用いると末梢循環改善作用があるため、実際に臨床の場で用いられている。本研究において、カリクレインの培養系への添加が血管内皮細胞のPGI_2産生量を10倍以上にも高めることを見つけた。この効果は他の種類の細胞では見られず、血管内皮細胞に特有のものであった。また、カリクレインの本作用は一過性のものではなく、少なくとも24時間まで持続して認められた。カリクレインの本効果の発現には血清の存在が不可欠であることもわかった。さらに詳しく検討した結果、カリクレインが血清蛋白に働いて分子量10,000以下のペプチドを産生し、そのペプチドに血管内皮細胞のPGI_2産生促進作用のあることが判明した。HPLCによる分析の結果、このペプチドはプラジキニンやカリジン、サブスタンスP、Des、Argブラジキニンなど、既知のペプチドとは異なるものであることがわかった。目下、この未知のペプチドの構造決定を行っている。

前列环素（PGI_2）是血管内皮细胞产生的花生四烯酸代谢产物，对血小板聚集有极强的抑制作用。根据迄今为止的许多研究，PGI_2被认为是一种内源性抗动脉硬化因子。为了了解体内调节 PGI_2 产生的机制，我们使用血管内皮细胞培养系统进行了研究。将源自牛颈动脉的内皮细胞在含有10%胎儿血清的培养基中培养。当向该培养体系中添加缓激肽、组胺、凝血酶等时，会刺激血管内皮细胞，激活磷脂酶A_2，随后从细胞膜释放花生四烯酸，从而促进PGI_2的产生。激肽释放酶是一种作用于血液中存在的激肽原产生缓激肽的酶，作为药物使用时具有改善末梢循环的作用，因此在临床上实际使用。在这项研究中，我们发现在培养系统中添加激肽释放酶可使血管内皮细胞产生的 PGI_2 增加 10 倍以上。这种效应在其他细胞类型中没有观察到，并且是血管内皮细胞所独有的。此外，激肽释放酶的这种作用不是短暂的，而是观察到持续至少 24 小时。还发现血清的存在对于激肽释放酶的这种作用的表达是必需的。进一步详细研究发现，激肽释放酶作用于血清蛋白，产生分子量小于10,000的肽，这些肽具有促进血管内皮细胞产生PGI_2的作用。 HPLC 分析表明，该肽与已知肽如激肽、激肽、P 物质、Des 和 Arg 缓激肽不同。我们目前正在确定这种未知肽的结构。