カリクレインにより血中で生成されるPGI_2産生促進ペプチドの分離同定と作用機構

激肽释放酶在血液中产生的PGI_2促产肽的鉴定及其作用机制

基本信息

批准号：
63637502
负责人：
室田誠逸
金额：
$ 0.9万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-63637502/
关键词：
プロスタサイクリン PGI_2 血管内皮細胞カリクレイン

项目摘要

プロスタサイクリン(PGI_2)は、血管内皮細胞が産生するアラキドン酸代謝物で、きわめて強い血小板凝集抑制作用をもっている。これまでの多くの研究から、PGI_2は内因性の動脈硬化予防因子であると考えられる。生体内におけるPGI_2の生成が如何なる機序で調節されているのかを知るために、血管内皮細胞の培養系を用いて検討を行った。ウシ頚動脈由来の内皮細胞を10%の仔胎児血清を含む培養液で培養した。この培養系にブラジキニンやヒスタミン、トロンビンなどを添加すると、血管内皮細胞が刺激され、ホスホリパーゼA_2の活性化、ついで細胞膜からアラキドン酸の遊離が起こり、その結果としてPGI_2産生が促進される。カリクレインは血中に存在するキニノーゲンに働いてブラジキニンを産生させる酵素であるが、薬剤として用いると末梢循環改善作用があるため、実際に臨床の場で用いられている。本研究において、カリクレインの培養系への添加が血管内皮細胞のPGI_2産生量を10倍以上にも高めることを見つけた。この効果は他の種類の細胞では見られず、血管内皮細胞に特有のものであった。また、カリクレインの本作用は一過性のものではなく、少なくとも24時間まで持続して認められた。カリクレインの本効果の発現には血清の存在が不可欠であることもわかった。さらに詳しく検討した結果、カリクレインが血清蛋白に働いて分子量10,000以下のペプチドを産生し、そのペプチドに血管内皮細胞のPGI_2産生促進作用のあることが判明した。HPLCによる分析の結果、このペプチドはプラジキニンやカリジン、サブスタンスP、Des、Argブラジキニンなど、既知のペプチドとは異なるものであることがわかった。目下、この未知のペプチドの構造決定を行っている。

前列环蛋白（PGI_2）是由血管内皮细胞产生的花生四烯酸代谢产物，对血小板聚集具有极强的抑制作用。许多先前的研究表明，PGI_2是一种内源性动脉粥样硬化预防因素。为了找出哪些机制调节体内PGI_2的产生，我们使用血管内皮细胞培养系统研究了结果。在含有10％胎牛血清的培养基中培养源自牛颈动脉的内皮细胞。在该培养系统中添加心动激肽，组胺，凝血酶等。刺激内皮细胞，激活磷脂酶A_2并从细胞膜中释放蛛网膜烯酸，从而促进PGI_2产生。 kallikrein是一种作用于血液中的依诺原质并产生缓激肽的酶，但是当用作药物时，它具有改善周围循环的作用，并且实际上在临床环境中使用。在这项研究中，我们发现在培养系统中添加Kallikrein在血管内皮细胞中的PGI_2产生增加了10倍以上。在其他类型的细胞中没有看到这种作用，并且是血管内皮细胞独有的。此外，Kallikrein的这种影响不是短暂的，并且长时间观察到至少24小时。还发现，血清的存在对于发展Kallikrein的这种影响至关重要。进一步的检查表明，kallikrein作用于血清蛋白上产生分子量为10,000或更少的肽，并且该肽具有促进PGI_2血管内皮细胞的产生的作用。 HPLC分析表明，该肽不同于已知的肽，例如pradyinikin，kalisine，pess p，des和arg arg radyininin。目前，正在确定该未知肽的结构。