血液凝固・線溶調節因子の分子生物学的研究

凝血纤溶调节剂的分子生物学研究

基本信息

批准号：
63637001
负责人：
青木延雄
金额：
$ 15.36万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.線溶制御因子アルファ2プラスミンインヒビター(PI)の遺伝子構造を明らかにし、さらに先天性PI欠損症の一家系についてその遺伝子の変異を究明した。その家系のホモ接合体の解析で、遺伝子に再構成や大きな欠落はみとめられず、唯一の変化としてC末端部をコードする領域にシチジンが1ケ挿入されていた。その結果、フレームシフトが起り、C末端12のアミノ酸の置換と166のアミノ酸の附加によるペプチド鎖の延長が起ることが判明した。発現実験でもそれが確認された。PIの遺伝子の染色体上の局在も18p11.2→q11.2と決定された。2.凝固線溶制御調節因1ヒスチジンリッチ糖蛋白(HRG)の正常遺伝子を解析し、約11キロ塩基対の大きさで9ケのエクソンと8ケのイントロンからなることが明らかになった。HRGのN末端領域の2ケのシスタチン様ドメインはいずれも3ケづつのエクソンで構成され、各イントロンの介在位置はキニノーゲンの3ケのシスタチン様ドメインのそれと同じであり、両遺伝子は共にシスタチンスーパー遺伝子ファミリーに属するものであることが判明した。3.凝固のプロテインCを介する制御系において、補酵素的役割を果す血管内皮膜の蛋白トロンボモデュリン(TM)が血小板にも存在することが明らかになった。血小板TMは分子量、機能とも血管内皮細胞のTMと全く同様であり、血小板TMは、血管傷害部位に凝集した血小板上で凝固制御に関与すると考えられる。活性化プロテインCの抗凝固作用を促進するプロテインS(PS)の補体系成分C4bpとの結合部位を解析し、C4bpのC末端近傍にPSが結合することが明らかになった。4.凝固線溶の阻止にも働くアルファ2マクログロブリン(MG)の遺伝子のプロモーター領域の配列を決定し、他の急性相蛋白との比較から、急性相蛋白遺伝子と相同性の高い配列が見出された。この配列に特異的に結合する蛋白を肝細胞核蛋白より精製した。

1。揭示了纤溶调节因子α2纤溶酶抑制剂（PI）的遗传结构，并研究了先天性PI缺乏症家族基因的突变。对该家族中纯合子的分析没有表现出基因的重构或主要缺陷，唯一的变化是将单个胞苷插入编码C末端的区域。结果，发生了一个边框，发现在C末端12的氨基酸取代并添加166个氨基酸会导致肽链的扩展。这在表达实验中得到了证实。 PI基因的染色体定位也被确定为18p11.2至Q11.2。 2。对一种富含组氨酸的糖蛋白（HRG）的正常基因的分析是凝血纤维蛋白溶解的调节剂，表明它是由9个外显子和八个内含子组成的大约11千个酶对。 HRG的N末端区域中的两个半胱氨酸蛋白酶样结构域均由三个外显子组成，每个内含子的中间位置与依诺原的三个类囊蛋白样结构域的中间位置相同，并且发现两个基因都属于伴半胱氨酸蛋白酶超级元素。 3。已经揭示了血小板结合蛋白（TM）是一种内皮膜中的蛋白质，在血小板中也存在于蛋白C介导的凝结调节系统中在蛋白C介导的调节系统中起辅酶作用的作用。血小板™在分子量和血管内皮细胞的功能方面是相同的，而血小板™被认为参与血小板对血小板的凝血控制，在血管损伤部位聚集。分析了促进活化蛋白C的抗凝作用的蛋白S（PS）的结合位点，分析了C4BP的抗凝作用，并揭示了PS与C4BP的C-末端的结合。 4。确定了α2型巨球蛋白（MG）基因的启动子区域的序列，该基因也可以通过将其与其他急性相蛋白蛋白蛋白进行比较，从而确定了与急性相蛋白基因相同的序列，并且与急性相蛋白基因具有高度同源性。特异性结合该序列的蛋白质是从肝细胞核蛋白中纯化的。