ヘルペスウイルスRNAの核外輸送制御機構の解明

阐明疱疹病毒RNA的核输出控制机制

基本信息

批准号：
19041027
负责人：
萩原正敏
金额：
$ 4.8万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19041027/
关键词：
単純ヘルペスウイルス PML ICP27 選択的スプライシング

项目摘要

単純ヘルペスウイルス2型(HSV-2 ; Herpes Simplex Virus type-2) は世界中に広く伝播しているDNAウイルスで、性器ヘルペスを主症状とする。HSV-2のウイルスゲノム複製は宿主細胞の核内で行われるが、HSV-2ゲノムは宿主染色体には組み込まれず、リング状となり、PML(promyelocytic leukemia protein, TRIM19)を主成分とするドット状の核内構造体ND10(PML body, POD) に取り込まれる。PMLのpre-mRNAは選択的スプライシングを受け7種のPMLアイソフォーム蛋白が産生される。我々はHSV-2感染によって、PNL pre-mRNAの選択的スプライシングが影響を受け、PML蛋白質のアイソフォームが変化することを見出した。すなわち、非感染状態の細胞ではI型とII型PMLが主に発現しているが、HSV-2感染細胞ではV型が主に発現する。この選択的スプライシングの変化をRFPの発現で可視化できるスプライシングレポーターを作成して培養細胞内に導入した。このレポーター細胞では、非感染状態の細胞はRFPが発現するが非感染細胞ではRFPの発現が消失しており、蛍光顕微鏡下で感染・非感染の識別が可能となった。このスプライシングレポーター細胞に種々のウイルス蛋白を発現させてウイルス由来のスプライシング制御因子を検索したところ、核外輸送蛋白ICP27がPML mRNAをII型からV型へ変換していることが判明した。ICP27のRNA認識機構は予想外に複雑であることが判明したので、CLIPと呼ばれる新しい研究手法でICP27の標的遺伝子転写産物の解析を進めている。

单纯疱疹病毒2型（HSV-2）是一种在世界范围内广泛传播的DNA病毒，其主要症状是生殖器疱疹。 HSV-2病毒基因组复制发生在宿主细胞核内，但HSV-2基因组并未整合到宿主染色体中，而是形成环形、点状基因组，其主要成分为PML（早幼粒细胞白血病）蛋白质，TRIM19）被吸收到核结构ND10（PML体，POD）中。 PML 前体 mRNA 经过选择性剪接，产生七种 PML 亚型蛋白。我们发现HSV-2感染影响了PNL前体mRNA的选择性剪接并改变了PML蛋白的亚型。即，在未感染的细胞中，主要表达I型和II型PML，而在HSV-2感染的细胞中，主要表达V型。我们创建了一个剪接报告基因，可以通过表达 RFP 并将其引入培养细胞中来可视化选择性剪接的变化。在该报告细胞中，未感染的细胞表达RFP，但RFP表达在未感染的细胞中消失，使得可以在荧光显微镜下区分感染和未感染的细胞。当我们通过在这些剪接报告细胞中表达各种病毒蛋白来寻找病毒衍生的剪接控制因子时，我们发现核输出蛋白ICP27将PML mRNA从II型转化为V型。由于ICP27的RNA识别机制被发现异常复杂，我们目前正在使用一种称为CLIP的新研究方法来分析ICP27的靶基因转录本。