バンコマイシン耐性腸球菌VREの新たな高頻度接合伝達性プラスミドの研究

一种新的耐万古霉素肠球菌VRE超接合传播质粒的研究

基本信息

批准号：
19041013
负责人：
富田治芳
金额：
$ 5.31万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

日本の臨床分離VRE株(E, faecium)加ら新たに分離したpMG1型ハンコマイシン耐性高頻度接合伝達性プラスミドpHTβは、バンコマイシン耐性を他の腸球菌へ高頻度で伝達させると同時に宿主菌に凝集性を与える。pHTβはpMG1と遺伝子配列上高い相同性を示し、構造的に非常に近縁の伝達性プラスミドであることが示された。pHTβのトランスポゾンTn917-lacを用いた挿入変異プラスミドの作製分離とその解析から、プラスミド上の接合伝達に関与する3つの領域(Tra I, Tra II, Tra III)を同定した。さらにpHTβにコードされる凝集領域の解析を行った。凝集領域のクローン化、及びその遺伝学的解析から、凝集に必要な領域を決定した。凝集にはTra I内上流域に存在するORF9~ORF13の5個のORFが関与していた。この領域の転写を調べたところ、ORF9上流の高いプロモーター活性領域から始まる長い転写産物が検出され、これらのORFはオペロン構造を形成していた。またTra II領域内のORF56のトランスポゾン挿入変異あるいは欠失変異は伝達性と凝集性を失っており、同時にORF10、ORF13の転写活性も著しく低下していた。それらの形質はクローン化したORF56により相補されたことから、ORF56はプラスミドの伝達性、凝集性を転写活性レベルで正に調節する遺伝子であることが示され、traBとした。traB上流には恒常的な活性を示すプロモーターが存在し、traB下流に位置するtraAとオペロン構造をとっていた。pMG1にコードされ、traBと同等の遺伝子である710RF1のプラスミドを作成し解析した。予想に反し、pMG1のtraB同等変異プラスミドは伝達性を完全には失わず、野生型と比べその伝達頻度は十分の一程度の低下であった。この結果はtraBがTra Iの凝集遺伝子領域および接合伝達遺伝子領域の転写活性を別め因子を介し、おそらく間接的にORF9上流のプロモーター領域に働くことにより調節していることを示唆している。

一种新分离的PMG1型癌霉素抗性的高频共轭转移质粒PHTβ，它是一种临床上孤立的日本菌株（E，粪便），经常将万古霉素抗性传播到其他肠球菌，并向宿主细菌构成聚集。 PHTβ与PMG1表现出高基因序列同源性，表明它是一种高度结构上相关的可传播质粒。通过使用pHTβ的tn917-Lac对插入突变质粒的产生分离和分析，通过生成分离和分析插入突变质粒的产生分离和分析来鉴定出参与质粒上共轭传递的三个区域。此外，分析了由PHTβ编码的聚集区。通过克隆聚集区及其遗传分析来确定聚集所需的区域。在Tra I上游区域中存在的五个ORF，ORF9至ORF13参与了聚合。该区域的转录揭示了从ORF9上游的高启动子活性区域开始的长转录物，该区域形成了操纵子结构。此外，TRA II区域内ORF56的转座子插入或缺失突变失去了其可传递性和聚集，同时oRF10和ORF13的转录活性显着降低。克隆的ORF56补充了这些特征，表明ORF56是一个基因，可正化质粒在转录活性水平上的透射率和凝聚力，使其成为小动物。表现出构成活性的启动子存在于Trab的上游，并具有一个操纵子结构，其Traa位于Trab的下游。制备并分析了由PMG1编码并等效于Trab的710rf1的质粒。与期望相反，与野生型相比，PMG1的小动物当量突变质粒并未完全失去其可传播性，并且其传输频率降低了大约什一税。该结果表明，TRAB调节Tra I通过单独因素的聚集和共轭基因区域的转录活性，这可能是通过在ORF9上游的启动子区域中间接作用的。