複製チェックポイントによる複製フォーク安定化維持機構の解明

阐明复制检查点稳定和复制叉维持的机制

基本信息

批准号：
18058015
负责人：
田中克典
金额：
$ 3.33万
依托单位：
Kwansei Gakuin University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18058015/
关键词：
複製チェックポイント分裂酵母 ChIP法 Mrcl 細胞周期染色体 Mrc1

项目摘要

ゲノムDNAの複製を完了させるためには、DNA複製フォークが安定に維持され、種々の障害を乗り越える必要がある。複製フォークにはその進行をモニターし、緊急時に複製フォークを保護する因子が付随していることが最近明らかとなってきた。それらは、Tof1/Swi1/Timeless-Csm3/Swi3/Tipin複合体(複製フォーク保護複合体)、およびMrc1/Claspinである。それらは、複製開始時に複製フォークにローディングされ、MCMやCdc45と相互作用しつつ、複製の進行をモニタリングし、複製フォーク複合体の活性や集合状態を細胞周期やチェックポイント応答と連動させる機能制御の役割をもつと考えられる。我々は、分裂酵母の系を用いて複製チェックポイントメディエーター分子Mrc1を中心に、複製フォークの保護とチェックポイント応答の連動について解析を行っている。クロマチン免疫沈降(ChIP)法により、Swi1-Swi3複製フォーク保護複合体依存的・複製チェックポイント非依存的に、複製の進行に伴いMrc1が複製フォークの上を移動しているという明確な結果を得た。さらに、Mrc1のDNA結合ドメインとして報告されている領域は、Mrc1の複製フォークへの結合に必要でないことがわかった。しかし、DNA結合ドメインの変異体はCPTに感受性を示し、Rad22-YFPを用いた観察により複製フォークの不安定化が生じていることもわかった。これらの結果より、Mrc1のDNA結合活性は、複製フォークへの結合以降の段階で、複製フォークの安定化に機能している事が示唆された。

为了完成基因组DNA的复制，DNA复制叉必须稳定维持并克服各种障碍。最近已经清楚的是，复制分叉与监控其进度并在紧急情况下保护它们的因素有关。它们是 Tof1/Swi1/Timeless-Csm3/Swi3/Tipin 复合体（复制叉保护复合体）和 Mrc1/Claspin。它们在复制开始时加载到复制叉上，与 MCM 和 Cdc45 相互作用，监测复制进度，并控制复制叉复合物的功能，以协调其活动和组装状态与细胞周期和检查点反应。被认为有一定的作用。使用裂殖酵母系统，我们正在分析复制叉保护和检查点反应之间的联系，重点关注复制检查点介体分子 Mrc1。使用染色质免疫沉淀 (ChIP)，我们获得了明确的结果，即随着复制以 Swi1-Swi3 复制叉保护复合物依赖性和复制检查点无关的方式进行，Mrc1 在复制叉上移动。此外，我们发现被报道为 Mrc1 DNA 结合域的区域并不是 Mrc1 与复制叉结合所必需的。然而，DNA 结合域中的突变体对 CPT 敏感，使用 Rad22-YFP 的观察也表明复制叉不稳定。这些结果表明，Mrc1的DNA结合活性在与复制叉结合后的阶段起到稳定复制叉的作用。