温度感受性TRPチャネルの機能解明を目指した細胞内蛍光性温度センサーの開発
开发细胞内荧光温度传感器,旨在阐明温度敏感 TRP 通道的功能
基本信息
- 批准号:18038024
- 负责人:
- 金额:$ 1.15万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
- 财政年份:2006
- 资助国家:日本
- 起止时间:2006 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
これまでにin vitroでの温度センサー構築まで成功していたので、本研究では「細胞内での温度センサーの評価」を中心に研究を遂行した。一方、in vitroで機能した蛍光センサーが細胞内でも同様に機能するとは限らないので、感度向上などを主な目的として、「センサー機能の向上」も平行して進めた。「細胞内での温度センサーの評価」動物細胞発現プラスミドにTlpA-GFP融合体を組み込んだ後に、様々な動物細胞株(HEK293,免疫細胞DT40,神経細胞PC12)で融合タンパク質を一過的発現させて、細胞温度を変化させた際の蛍光変化を評価した。細胞膜近傍での細胞内温度を測定するために、TlpA-GFP融合体に細胞膜移行シグナルをつけて温度センサーを細胞膜にターゲッティングさせた。共焦点レーザー走査顕微鏡観察を行い、細胞断片の蛍光強度を用いて細胞膜の微小領域でのratio380/480を算出した。「センサー機能の向上」in vitroで成功した第一世代の温度センサーは、細胞内での評価を行なうにはratio380/480の変化量が小さかった。そこで、感度向上を目指してcircular permutation法(Tsien et al.,Proc. Natl. Acad. Sci. USA,1999)を採用して、第二世代の温度センサーも作成した。
由于我们之前已经成功地在体外构建了温度传感器,因此这项研究的重点是“细胞内温度传感器的评估”。另一方面,由于在体外起作用的荧光传感器不一定在细胞内以相同的方式起作用,因此我们还致力于“改善传感器功能”,其主要目标是提高灵敏度。 “细胞内温度传感器的评价” 将TlpA-GFP融合蛋白整合到动物细胞表达质粒中后,融合蛋白在各种动物细胞系(HEK293、免疫细胞DT40、神经元细胞PC12)中瞬时表达时荧光的变化。评估电池温度的变化。为了测量细胞膜附近的细胞内温度,我们将细胞膜定位信号附加到 TlpA-GFP 融合物上,以将温度传感器定位到细胞膜。进行共聚焦激光扫描显微镜,并利用细胞碎片的荧光强度计算细胞膜微区域中的比率380/480。 “改进的传感器功能” 在体外取得成功的第一代温度传感器在细胞评估中的比率 380/480 发生了微小变化。因此,为了提高灵敏度,我们采用循环排列法(Tsien et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1999)来创建第二代温度传感器。
项目成果
期刊论文数量(3)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
The TRPC3 channel has a large internal chamber surrounded by signal sensing antennas
- DOI:10.1016/j.jmb.2006.12.043
- 发表时间:2007-03-23
- 期刊:
- 影响因子:5.6
- 作者:Mio, Kazuhiro;Ogura, Toshihiko;Sato, Chikara
- 通讯作者:Sato, Chikara
Oligo-Asp Tag/Zn(II) complex probe as a new pair for labeling and fluorescence imaging of proteins
- DOI:10.1021/ja0618604
- 发表时间:2006-08-16
- 期刊:
- 影响因子:15
- 作者:Ojida, Akio;Honda, Kei;Hamachi, Itaru
- 通讯作者:Hamachi, Itaru
{{
item.title }}
{{ item.translation_title }}
- DOI:
{{ item.doi }} - 发表时间:
{{ item.publish_year }} - 期刊:
- 影响因子:{{ item.factor }}
- 作者:
{{ item.authors }} - 通讯作者:
{{ item.author }}
数据更新时间:{{ journalArticles.updateTime }}
{{ item.title }}
- 作者:
{{ item.author }}
数据更新时间:{{ monograph.updateTime }}
{{ item.title }}
- 作者:
{{ item.author }}
数据更新时间:{{ sciAawards.updateTime }}
{{ item.title }}
- 作者:
{{ item.author }}
数据更新时间:{{ conferencePapers.updateTime }}
{{ item.title }}
- 作者:
{{ item.author }}
数据更新时间:{{ patent.updateTime }}
清中 茂樹其他文献
グルタミン酸受容体の構造変化に着目したケモジェネティクス法の開発
开发关注谷氨酸受体结构变化的化学遗传学方法
- DOI:
- 发表时间:
2022 - 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
Hongwei Zhang;Takaomi Itoi;Kaori Niki;Takehisa Konishi;and Yasuo Izumi;清中 茂樹 - 通讯作者:
清中 茂樹
細胞外ループ工学によるGPCR化学遺伝学(2): ECL3に着目したアデノシン受容体の活性制御
利用细胞外环工程的GPCR化学遗传学(二):关注ECL3的腺苷受体活性调控
- DOI:
- 发表时间:
2021 - 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
松岡 佑真;杓野 拓光;堂浦 智裕;清中 茂樹 - 通讯作者:
清中 茂樹
代謝型グルタミン酸受容体の細胞外ループに注目した新たな化学遺伝学手法の開発
开发一种新的化学遗传学方法,重点关注代谢型谷氨酸受体的细胞外环
- DOI:
- 发表时间:
2020 - 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
長谷川 寛太;堂浦 智裕;清中 茂樹 - 通讯作者:
清中 茂樹
Extracellular Loop-Engineered Chemogenetics (eLEC) [1]: ECL2に着目したドーパミンD1受容体の活性制御
细胞外环工程化学遗传学 (eLEC) [1]:以 ECL2 为重点的多巴胺 D1 受体活性控制
- DOI:
- 发表时间:
2022 - 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
柏 俊太朗;堂浦 智裕;清中 茂樹 - 通讯作者:
清中 茂樹
細胞外ループ工学によるGPCR化学遺伝学(1):ECL2に着目したヒスタミン受容体の活性制御
利用细胞外环工程的GPCR化学遗传学(一):以ECL2为中心控制组胺受体活性
- DOI:
- 发表时间:
2021 - 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
柏 俊太朗;堂浦 智裕;清中 茂樹 - 通讯作者:
清中 茂樹
清中 茂樹的其他文献
{{
item.title }}
{{ item.translation_title }}
- DOI:
{{ item.doi }} - 发表时间:
{{ item.publish_year }} - 期刊:
- 影响因子:{{ item.factor }}
- 作者:
{{ item.authors }} - 通讯作者:
{{ item.author }}
{{ truncateString('清中 茂樹', 18)}}的其他基金
In vivo制御に向けた人工リガンド・受容体ペア設計の学理構築
体内控制人工配体/受体对设计理论的建立
- 批准号:
24H00492 - 财政年份:2024
- 资助金额:
$ 1.15万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
シナプス前終末におけるカルシウムチャネル複合体の集積・制御機構の分子基盤
突触前末端钙通道复合物积累和控制机制的分子基础
- 批准号:
20022021 - 财政年份:2008
- 资助金额:
$ 1.15万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
細胞内微小空間の温度分布を可視化する蛍光性温度センサーの開発
开发可视化细胞内微空间温度分布的荧光温度传感器
- 批准号:
19021024 - 财政年份:2007
- 资助金额:
$ 1.15万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
受容体活性化型チャネルの機能解明を目指したTRPチャネル拮抗剤の開発
开发 TRP 通道拮抗剂,旨在阐明受体激活通道的功能
- 批准号:
18750146 - 财政年份:2006
- 资助金额:
$ 1.15万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
細胞内蛋白質の活動の可視化を目指した蛍光性バイオセンサー構築
构建用于细胞内蛋白质活性可视化的荧光生物传感器
- 批准号:
03J08766 - 财政年份:2003
- 资助金额:
$ 1.15万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
固相合成法を用いた人工糖脂質ライブラリーの構築と新規バイオマテリアルへの展開
固相合成人工糖脂库的构建及其在新型生物材料中的应用
- 批准号:
01J10206 - 财政年份:2001
- 资助金额:
$ 1.15万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
相似海外基金
有尾両生類の高温忌避温度を決定する分子センサーの同定
确定尿指两栖动物耐热温度的分子传感器的鉴定
- 批准号:
23K19410 - 财政年份:2023
- 资助金额:
$ 1.15万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
病原ビブリオの温度センサーシステムの機能解析
致病弧菌温度传感系统的功能分析
- 批准号:
22K07070 - 财政年份:2022
- 资助金额:
$ 1.15万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
ダイヤモンド量子センサーを用いた心筋収縮制御特性の温度生理学
使用金刚石量子传感器的心肌收缩控制特性的温度生理学
- 批准号:
22K15367 - 财政年份:2022
- 资助金额:
$ 1.15万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
異なる低温環境に棲む4種の有尾両生類の侵害温度センサーの特性解明
生活在不同低温环境下的四种铀酸盐两栖动物夜间温度传感器的表征
- 批准号:
22K06324 - 财政年份:2022
- 资助金额:
$ 1.15万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
The molecular basis and evolutionary mechanism for thermal response behaviors related to habitat selection in amphibians
两栖动物栖息地选择相关热响应行为的分子基础和进化机制
- 批准号:
22H02679 - 财政年份:2022
- 资助金额:
$ 1.15万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)