1分子・1細胞レベルでの酵母プリオンのダイナミクス観察

单分子和单细胞水平的酵母朊病毒动力学观察

基本信息

批准号：
18031007
负责人：
田口英樹
金额：
$ 8.26万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

プリオンとは蛋白質性の感染因子である。プリオンでは、異常型蛋白質(プリオン)はアミロイド線維様の凝集状態であり、そのアミロイド凝集体は自己触媒的に正常型(モノマー)をアミロイド様の凝集状態に構造転換さる。そのアミロイド様の凝集構造がどのように形成されるのか、またプリオンが細胞内でどのように伝播していくのか、に関して詳細はいまだ不明である。その一つの理由としては、従来の生化学・細胞生物学的な手法では多くの線維や細胞の平均を見るだけなので個別の情報が得られず、詳細を知るには限界がある点が挙げられる。そのような状況において、我々は安全な出芽酵母のプリオン現象をモデルにしてプリオン線維の成長を一本一本観察する実験系の確立、X線線維回折実験による線維構造のβヘリックスモデルの提案などを行ってきた。特に最近では、in vitro、in vivo両面において、一個一個の正常型蛋白質が線維に取り込まれるようすやプリオンが細胞内で伝搬していくようすを「生きたまま」個別に観察してプリオン現象を分子レベルで理解することを目的としている。本特定領域による19年度の成果としては、(in vitro)線維末端に1分子1分子の酵母プリオン蛋白質Sup35が付加していくようすを実時間で観察することに成功し、その結果を速度論的に解析した。これにより、線維末端での構造変換にかかる時間が推定できた。(in vivo)細胞内でのプリオン蛋白質によるアミロイドを単離精製する条件を探索した。プリオンのオリゴマーがどのようなメカニズムで娘細胞に伝播するのかについて調べる実験系を構築した。

prion是蛋白质感染因子。在prions中，异常蛋白（prion）是淀粉样纤维的聚集，淀粉样蛋白聚集体是一种自催化（单体）结构转化为淀粉样蛋白样聚集的自催化（单体）。关于如何形成淀粉样蛋白聚集结构以及如何在细胞中传播蛋白的细节仍然未知。原因之一是传统的生化和细胞生物学技术仅着眼于许多纤维和细胞的平均值，因此无法获得个体信息，并且了解细节是有限的。在这种情况下，我们建立了一个实验系统，可以使用安全的胚芽酵母菌prion现象一个一个一个一个一个纤维纤维的生长，并提出了我使用X射线的纤维结构的纤维结构。尤其是最近，在体外和体内，通过观察“活着”的“活着”观察到prion现象在细胞中传播，从而使每种正常型蛋白都掺入纤维中。水平。由于2019财年在特定区域中，结果在观察（体外）肌端的（体外）纤维末端，结果是相关的快速观察，结果是我进行了快速的理论。结果，估计了纤维端的结构转化所需的时间。（体内）探索了细胞中prion蛋白分离和纯化的条件。我们已经建立了一个实验系统，以研究王子低聚物的哪种机制向子细胞传播。