ATLにおけるケモカイン受容体CCR4高頻度発現と発がん機構との関係の解明

阐明ATL趋化因子受体CCR4高表达与致癌机制的关系

基本信息

批准号：
18012047
负责人：
義江修
金额：
$ 7.1万
依托单位：
Kinki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

CCR4のプロモーター解析によりATLでの転写活性化サイトとしてGATA-3サイトとAP-1サイトを同定した。GATA-3はTh2細胞で選択的に発現し、CCR4のTh2選択的発現に関係すると考えられた。一方、AP-1はFosファミリーとJunファミリーのホモダイマーあるいはヘテロダイマーとして機能する。そこでAP-1ファミリーのATLでの発現を検討した。その結果、ATLの臨床検体ではFra-2、JunD、JunBの構成的発現が見られた。さらにCCR4プロモーターの活性化はFra-2/JunDおよびFra-2/JunBのヘテロダイマーがきわめて特異的に誘導することを見出した。さらにFra-2の発現はHTLV-1の転写因子Taxでは誘導されないことも確認した。発がん遺伝子Fra-2の正常T細胞での発現やATLでの構成的活性化はいまだ報告されていない。そこでATLでのFra-2、JunD、JunBの役割をsiRNAノツクダウンで検討した。その結果、Fra-2とJunDのsiRNAがCCR4発現および細胞増殖を抑制した。またFra-2あるいはJunDをJurkatで強制発現すると細胞増殖を促進した。そこでATLでのFra-2の下流標的遺伝子をFra-2 siRNAによるノックダウンとマイクロアレイ解析で検討した。その結果、Fra-2のsiRNAによりATL細胞株で少なくとも49の遺伝子が3倍以上の低下を示した。この中には発がん遺伝子c-Myb、Bc1-6、MDM2も含まれていた。そしてこれらの発がん遺伝子の発現はJunDのsiRNAでも抑制され、Fra-2/JunDヘテロダイマーの下流遺伝子であることが示された。さらにATLの臨床検体でもこれらの発がん遺伝子の構成的発現が確認された。発がん遺伝子Fra-2、c-Myb、Bc1-6、MDM2のATLでの構成的発現は初めての知見である。

CCR4 启动子分析鉴定出 GATA-3 和 AP-1 位点是 ATL 中的转录激活位点。 GATA-3 在 Th2 细胞中选择性表达，并被认为参与了 CCR4 的 Th2 选择性表达。另一方面，AP-1作为Fos家族和Jun家族的同二聚体或异二聚体起作用。因此，我们研究了AP-1家族成员在ATL中的表达。结果，在ATL临床标本中观察到Fra-2、JunD和JunB的组成型表达。此外，我们发现 Fra-2/JunD 和 Fra-2/JunB 异二聚体以高度特异性的方式诱导 CCR4 启动子激活。此外，我们证实 Fra-2 表达不是由 HTLV-1 转录因子 Tax 诱导的。癌基因 Fra-2 在正常 T 细胞中的表达以及 ATL 中的组成型激活尚未有报道。因此，我们使用 siRNA 敲低研究了 Fra-2、JunD 和 JunB 在 ATL 中的作用。结果，Fra-2 和 JunD siRNA 抑制了 CCR4 表达和细胞增殖。此外，Jurkat 中 Fra-2 或 JunD 的强制表达促进了细胞增殖。因此，我们利用 Fra-2 siRNA 敲低和微阵列分析研究了 ATL 中 Fra-2 的下游靶基因。结果，ATL细胞系中至少49个基因被Fra-2 siRNA减少了3倍或更多。其中包括癌基因 c-Myb、Bc1-6 和 MDM2。这些癌基因的表达也被JunD siRNA抑制，表明它们是Fra-2/JunD异二聚体的下游基因。此外，这些癌基因的组成型表达在 ATL 的临床标本中得到证实。这是首次发现癌基因 Fra-2、c-Myb、Bc1-6 和 MDM2 在 ATL 中组成型表达。