NF複合体によるc-fos遺伝子のクロマチン修飾と発現制御

NF复合物对c-fos基因染色质修饰及表达调控

基本信息

批准号：
17054037
负责人：
久武幸司
金额：
$ 2.3万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

当研究では、c-fos遺伝子の転写調節に関係すると考えられるNF複合体について主に生化学的手法を用いて解析を進めた。NF複合体はNF45、NF90又はNF45とNF110の複合体からなるが、組換え体NFタンパク質を用いてNF複合体のサブユニット構成をゲル濾過等で解析した結果、(NF45)_2(NF90)_2または(NF45)_2(NF110)_2とヘテロテトラマーを形成し、NF90とNF110は同一の複合体には存在しないことが明らかとなった。バキュロウイルスで発現させた組換え体の解析より、NF110,NF45/110はc-fos遺伝子の基本転写を活性化するのみで、NF90,NF45/90には非常に弱い転写活性化能しか認められなかった。そこで、NF45、NF90またはNF110にタグを付けた遺伝子をHeLa細胞に導入し、タグ付きのNF45、90及び110を含む複合体を精製した。その結果、NFタンパク質にはそれら以外に幾つかのペプチドが結合しより大きな複合体を形成していることが明らかとなった。この複合体は試験管内でc-fos遺伝子の転写を活性化することが観察され、転写活性化にはNF45、NF90、NF110以外の因子も関与していることが示唆された。NF複合体が転写活性化に関与することより、それぞれのNFタンパク質と他の転写因子との相互作用を検討した。その結果、NF複合体は、TFIIB,TFIID,TFIIHと結合することが分かった。さらにNF90,NF110,NF45/90,NF45/110RNAPIIとも弱く結合する。この転写活性化活性はpoly(I)-poly(C)で阻害される。以上より、NF因子は1)幾つかのペプチドと複合体を形成し、2)基本転写因子等と相互作用することによって転写を活性化し、3)この活性は一本鎖RNA等にて調節されていること、の3点が明らかとなった。

在本研究中，我们主要使用生化方法来分析NF复合物，该复合物被认为参与c-fos基因的转录调控。 NF复合体由NF45、NF90或NF45与NF110的复合体构成，使用重组NF蛋白通过凝胶过滤分析NF复合体的亚基组成，结果可知(NF45)_2(NF90)_2： NF90和NF110不存在于同一复合物中，与(NF45)_2(NF110)_2形成异四聚体。对杆状病毒表达的重组体进行分析发现，NF110和NF45/110仅激活c-fos基因的基本转录，而NF90和NF45/90仅具有非常弱的转录激活能力。因此，将带有 NF45、NF90 或 NF110 标签的基因引入 HeLa 细胞，并纯化含有标签 NF45、90 和 110 的复合物。结果表明，其他几种肽与 NF 蛋白结合形成更大的复合物。观察到该复合物在体外激活 c-fos 基因的转录，表明除 NF45、NF90 和 NF110 之外的因子也参与转录激活。由于 NF 复合物参与转录激活，我们研究了每种 NF 蛋白与其他转录因子之间的相互作用。结果发现，NF复合物与TFIIB、TFIID和TFIIH结合。此外，它与 NF90、NF110、NF45/90 和 NF45/110RNAPII 结合较弱。这种转录激活活性被聚（I）-聚（C）抑制。综上所述，NF因子1）与多种肽形成复合物，2）通过与基本转录因子相互作用来激活转录，3）这种活性受到单链RNA的调节等。三点变得清晰：

项目成果

期刊论文数量（2）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

基本転写因子とその関連疾患

基本转录因子与相关疾病

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Molecular Medicine 42・9
影响因子：
0
作者：
Jun-Li Luo;Hideaki Kamata;Michael Karin.;久武幸司
通讯作者：
久武幸司

The fission yeast protein, Ker1p, is an ortholog of RNA polymerase I subunit A14 in Saccharomyces cerevisiae, and is required for stable association of Rrn3p and RPA21 in Pol I.

裂殖酵母蛋白 Ker1p 是酿酒酵母中 RNA 聚合酶 I 亚基 A14 的直系同源物，是 Pol I 中 Rrn3p 和 RPA21 稳定结合所必需的。

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
J.Biol.Chem. 280・12
影响因子：
0
作者：
Imazawa Y;Hisatake K;Mitsuzawa H;Matsumoto M;Tsukui T;Nakagawa K;Nakadai T;Shimada M;Ishihama A;Nogi Y
通讯作者：
Nogi Y