FRETによる単一生細胞でのPMLボディ生理機能の可視化

通过 FRET 可视化单个活细胞中的 PML 身体生理学

基本信息

批准号：
17050002
负责人：
十川和博
金额：
$ 4.03万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17050002/
关键词：
可視化蛋白質 FLIM-FRET VBC複合体タンパク間相互作用

项目摘要

PMLボディは未知の機能をもつ核内ボディのひとつであるが,転写因子や転写介在因子などが局在することが報告されている。この構造を解明するための第一歩としてPMLボディ局在性のArntとLBP-1bを用いてFLIM-FRETにより以下の解析を行った。ArntはPASドメインとHLHモチーフをもち,それらによりAhリセプターやHIF-1αなどとヘテロダイマーを形成し,DNAに結合する核局在の転写因子である。COS-7細胞で一過性に発現すると,スペックル状に分布しPMLボディと一致した。ArntにCeruleanとCitrineを接合し,その間のFRETを観測した。PMしボディを大,中,小の大きさで3つに分類し,それぞれからのFRETシグナルを計測したところ,サイズによるシグナルの強弱は認められなかった。スペックルを形成せず,核に一様に分布している細胞サンプルからはFRETシグナルはほとんど計測されなかった。LBP-1bにCeruleanとCitrineを接合し,FRETシグナルを調べたところ,やはりPMLボディから,強いシグナルを計測した。核質に分布しているLBP-1bからのシグナルは弱かった。ArntもLBP-1bもホモダイマーを形成することが報告されているので,PMLボディからのFRETシグナルは,そこでダイマーを形成している可能性が考えられた。単なる凝集によるFRETの可能性も排除できず,今後二量体形成に必要な領域の欠失体を発現し,どちらの可能性が正しいか決定する予定である。

PML体是具有未知功能的核体之一，但据报道，转录因子和转录因子已找到。使用PML身体定位的ARNT和LBP-1B作为阐明该结构的第一步，通过FLIM-FRET进行以下分析。 ARNT具有PAS结构域和HLH基序，它是核站的转录因子，形成具有AH受体和HIF-1α的异二聚体，并与DNA结合。当Cos-7细胞瞬时表达时，它们分布在Specle中并匹配PML体。将Cerulean和Citrine连接到Arnt，并观察到它们之间的颗粒。将PM主体分为三类，中等，小尺寸，并且测量了来自每个尺寸的FRET信号，并且未观察到大小的大小。很少从均匀分布在没有形成光谱的细胞核中的细胞样品中测量fRET信号。当将Cerulean和Citrine连接到LBP-1B并检查FRET信号时，从PML体中测量了强信号。来自核Gennis中分布的LBP-1B的信号较弱。由于据报道ARNT和LBP-1B都形成同型二聚体，因此可以想象，来自PML体的FRET信号可以形成变暗器。由于仅凝聚力而引起的fret的可能性无法消除，并且将表达双体形成所需的耗尽的身体，哪些可能性是正确的。