多環状グアニジン系天然物の全合成とタンパク質間複合体化制御機構の解析

多环胍天然产物的全合成及蛋白质-蛋白质复合物调控机制分析

基本信息

批准号：
17035025
负责人：
長澤和夫
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Tokyo University of Agriculture and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

多環状グアニジンアルカロイドBatzelladine A〜Eは、HIV表層に存在する糖タンパク質gp-120とT細胞上に存在するタンパク質CD4細胞外領域との結合を阻害する。一方Batzelladine F〜Iは、CD4の細胞内領域に恒常的に結合しているチロシンキナーゼp56^<lck>の解離を促進する。Batzelladine類の標的タンパク質と結合部位を明らかにし、活性発現メカニズムを明らかにすることを目的として研究を行った。これまでに、Batzelladine類に共通の環状グアニジン骨格を立体選択的に構築する手法を確立し、Batzelladine A及びBatzelladine Dの全合成を達成している。そこで本年度はこれらの標的タンパク質の同定を目的に、ジアジリンおよびビオチン官能基を有するBatzelladine D誘導体プローブ化合物を合成した。合成したプローブ化合物、gp-120およびCD4を用いた結合解析実験により、プローブ化合物の標的タンパク質が"CD4"であることが明らかになった。さらに、プローブ化合物とCD4とのWesternBlottingにより得られるバンドを用いて、CD4上のリガンド結合サイトの解析を行った。即ち、観測されたバンドをトリプシン消化酵素を用いて処理し、得られるペプチドをタンデム型質量分析測定装置にて解析を行った。得られた結果を、CD4を単独で同様の処理を行い得た内部配列データと比較したところ、4種の内部配列が検出されたことがわかった。今後、これらの配列を解析し、結合サイトの同定を行う。

多环胍生物碱Batzelladine A至E抑制HIV表面上存在的糖蛋白gp-120与T细胞上存在的蛋白质CD4的细胞外区域之间的结合。另一方面，Batzelladine F至I促进酪氨酸激酶p56^<lck>的解离，其与CD4的细胞内区域组成性结合。本研究的目的是阐明Batzelladines的靶蛋白和结合位点，并阐明其活性机制。目前，我们已经建立了立体选择性构建Batzelladine共有的环状胍骨架的方法，并实现了Batzelladine A和Batzelladine D的全合成。因此，今年，我们合成了具有二氮丙啶和生物素官能团的Batzelladine D衍生物探针化合物，以鉴定这些目标蛋白。使用合成的探针化合物gp-120和CD4的结合分析实验表明，探针化合物的目标蛋白质是“CD4”。此外，使用通过探针化合物和CD4之间的蛋白质印迹获得的条带来分析CD4上的配体结合位点。即，用胰蛋白酶处理观察到的条带，并使用串联质谱仪分析所得肽。当将获得的结果与单独CD4的类似处理获得的内部序列数据进行比较时，发现检测到四种类型的内部序列。将来，我们将分析这些序列并确定结合位点。

项目成果

期刊论文数量（1）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Total Synthesis of (+)-Batzelladine A and (-)-Batzelladine D, and Identification of their Target Protein

( )-Batzelladine A 和 (-)-Batzelladine D 的全合成及其靶蛋白的鉴定

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Chemistry-A European Journal 11
影响因子：
0
作者：
Jun Shimokawa;Takanori Ishiwata;Koji Shirai;Hiroyuki Koshino;Aya Tanatani;Tadashi Nakata;Yuichi Hashimoto;Kazuo Nagasawa
通讯作者：
Kazuo Nagasawa