細胞骨格制御とがんの浸潤・転移の分子機構

细胞骨架调控与癌症侵袭/转移的分子机制

基本信息

批准号：
17014073
负责人：
中西宏之
金额：
$ 3.26万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

私共は、チュブリン・微小管結合タンパク質を検出するアッセイ法を開発し、新しい微小管結合タンパク質(p100)の単離に成功している。さらに私共は、ラット脳より微小管に結合するタンパク質を一括して精製し、それらを質量分析によって網羅的に解析しており、これまで新しい分子(g180、p110、p90)を発見している。本研究において、これらの新しい分子を解析し、以下の成果を得た。1.p100のN末端側は、in vitroでリン脂質のホスファチジルセリンとホスファチジルイノシトール4,5二リン酸に強く結合し、リポソームをチューブ状に変形させることを見出した。さらにp100を細胞に過剰発現させると、細胞膜がチューブ状に変形した。一方p100のC末端側は、クラスリン被覆ピットと小胞のコンポーネントであるEps15と結合することを明らかにした。微小管はクラスリン被覆小胞のソーティングに関わっていることが報告されている。したがって、p100はクラスリン被覆ピットや小胞の形成に関わり、初期のエンドサイトーシスのステップに機能していると考えられる。また、p100はRac低分子量Gタンパク質によって惹起されるラッフル膜に集積しており、エンドサイトーシスを介して細胞運動に関与していることが予想される。2.Mycタグを付加したp180を細胞に発現させると、p180は一次線毛に局在することを見出した。p110は、濁度法とローダミン-チュブリンを用いた解析より微小管形成を促進することを明らかにした。またp100は、サイクリン依存性タンパク質リン酸化酵素5(CDK5)によって少なくとも2カ所リン酸化され、このリン酸化によって微小管結合活性が抑制された。p90は微小管非体存的に中心体に局在した。このように本研究は予想以上に進展し、当初の目的をほぼ達成するこができた。

我们开发了一种检测微管蛋白-微管相关蛋白的测定方法，并成功分离出一种新的微管相关蛋白（p100）。此外，我们还从大鼠脑中大量纯化了与微管结合的蛋白质，并使用质谱法对其进行了全面分析，迄今为止已经发现了新的分子（g180、p110、p90）。在这项研究中，我们分析了这些新分子并获得了以下结果。 1.我们发现p100的N端在体外与磷脂酰丝氨酸和磷脂酰肌醇4,5二磷酸强烈结合，使脂质体变形为管状。此外，当细胞过度表达p100时，细胞膜变形为管状。另一方面，p100 的 C 端侧被发现与 Eps15 结合，Eps15 是网格蛋白包被的小凹和囊泡的组成部分。据报道，微管参与网格蛋白包被的囊泡的分选。因此，p100 参与网格蛋白包被的小凹和囊泡的形成，并且被认为在早期内吞步骤中发挥作用。此外，p100在Rac低分子量G蛋白诱导的褶皱膜中积聚，并有望通过内吞作用参与细胞运动。 2.我们发现当Myc标记的p180在细胞中表达时，p180定位于初生菌毛。使用比浊法和罗丹明微管蛋白分析表明p110促进微管形成。此外，p100 的至少两个位点被细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶 5 (CDK5) 磷酸化，并且这种磷酸化抑制了微管结合活性。 p90 以不依赖于微管的方式定位于中心体。就这样，这项研究的进展超出了我们的预期，我们能够实现大部分最初的目标。