ATLにおけるケモカイン受容体CCR4高頻度発現と発がん機構との関係

ATL趋化因子受体CCR4高频表达与致癌机制的关系

基本信息

批准号：
17013081
负责人：
義江修
金额：
$ 2.88万
依托单位：
Kinki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17013081/
关键词：
ATL 白血病 CCR4 ケモカイン受容体転写因子発がん遺伝子 Th2細胞制御性T細胞

项目摘要

我々は、ATLではケモカイン受容体CCR4が高頻度・強陽性であること、CCR4発現はATLの高頻度皮膚浸潤を説明するとともに、ATLの起源がTh2あるいは制御性T細胞であることを示唆することを報告した(Blood, 2002)。このようなATLでのCCR4高頻度・高レベル発現は、ATLの発がん機構と転写レベルで密接に関係している可能性がある。そこで本研究では、ATLでのCCR4発現に関わる転写因子を明らかにし、それらのATL発がんへの関与を検討する。まずATL細胞におけるCCR4の転写開始部位を5'-RACEによってマップした。その結果、ATL細胞でのCCR4転写はエクソン1の上流と第1イントロン内の2領域で開始されており、それぞれ第1プロモーターと第2プロモーターと命名した。そこで第1プロモーター1-kbおよび第2プロモーター2-kbをルシフェレースレポータープラスミドにクローニングし、レポーターアッセイを行った。その結果、これらのプロモーターはATL細胞で強い転写活性を示した。そこで、それぞれのプロモーター領域を5'側から削っていってレポーターアッセイを繰り返し、発現に必要な領域を絞り込んだ。そしてこれらの必要領域に存在する候補エレメントに次々と点変異を導入し、必要エレメントの同定を行っている。第1プロモーターおよび第2プロモーターともにTh2分化に関わるGATA-3の認識配列が重要であることをみいだしたが、それ以外にも共同して作用するエレメントが存在することが明らかになってきた。現在、これらのエレメントに結合する転写因子の同定とクローニングを進めている。今後はCCR4の発現に関与することが明らかになった転写因子について、それらのATL発がんにおける役割を強制発現系やsiRNAによるノックダウン実験によって明らかにする。さらに、ATL細胞でのこれらの転写因子の構成的な発現および機能亢進のメカニズムを分子レベルで明らかにする。それによっていまだ不明なところの多い遺伝子レベルでのATLの発がん機構に関して新たな知見をもたらす。

我们报道说，ATL的趋化因子受体CCR4高度阳性，并且CCR4表达解释了ATL的高频皮肤浸润，这表明ATL的起源是Th2或调节性T细胞（Blood，2002）。 CCR4在ATL中的这种高频和高级表达可能与转录水平与ATL的癌变密切相关。因此，在这项研究中，我们将澄清与ATL中CCR4表达有关的转录因子，并检查其参与ATL癌变。首先，通过5'-race映射了ATL细胞中CCR4的转录启动位点。结果，ATL细胞中的CCR4转录在外显子1和第一个内含子内的两个区域开始，分别被指定为第一个启动子和第二个启动子。因此，将第一个启动子1-kb和第二个启动子2-kb克隆到荧光素酶报告基质粒中，并进行了记者测定。结果，这些启动子在ATL细胞中表现出很强的转录活性。因此，将每个启动子区域从5'侧移除，并重复记者测定法以缩小表达所需的区域。然后，将点突变接一个地将其引入这些所需区域中存在的候选元素中，以识别所需的元素。尽管第一和第二启动子都发现与Th2分化有关的GATA-3的识别顺序很重要，但很明显，还有其他元素可以一起起作用。当前，我们正在识别和克隆与这些元素结合的转录因子。将来，已发现与CCR4表达有关的转录因子将通过强制表达系统和使用siRNA的敲低实验来揭示。此外，在分子水平上揭示了这些转录因子的本构表达和这些转录因子多动的机制。这为遗传水平的ATL的致癌作用提供了新的见解，这仍然是未知的。