ATLにおけるケモカイン受容体CCR4高頻度発現と発がん機構との関係

ATL趋化因子受体CCR4高频表达与致癌机制的关系

基本信息

批准号：
17013081
负责人：
義江修
金额：
$ 2.88万
依托单位：
Kinki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17013081/
关键词：
ATL 白血病 CCR4 ケモカイン受容体転写因子発がん遺伝子 Th2細胞制御性T細胞

项目摘要

我々は、ATLではケモカイン受容体CCR4が高頻度・強陽性であること、CCR4発現はATLの高頻度皮膚浸潤を説明するとともに、ATLの起源がTh2あるいは制御性T細胞であることを示唆することを報告した(Blood, 2002)。このようなATLでのCCR4高頻度・高レベル発現は、ATLの発がん機構と転写レベルで密接に関係している可能性がある。そこで本研究では、ATLでのCCR4発現に関わる転写因子を明らかにし、それらのATL発がんへの関与を検討する。まずATL細胞におけるCCR4の転写開始部位を5'-RACEによってマップした。その結果、ATL細胞でのCCR4転写はエクソン1の上流と第1イントロン内の2領域で開始されており、それぞれ第1プロモーターと第2プロモーターと命名した。そこで第1プロモーター1-kbおよび第2プロモーター2-kbをルシフェレースレポータープラスミドにクローニングし、レポーターアッセイを行った。その結果、これらのプロモーターはATL細胞で強い転写活性を示した。そこで、それぞれのプロモーター領域を5'側から削っていってレポーターアッセイを繰り返し、発現に必要な領域を絞り込んだ。そしてこれらの必要領域に存在する候補エレメントに次々と点変異を導入し、必要エレメントの同定を行っている。第1プロモーターおよび第2プロモーターともにTh2分化に関わるGATA-3の認識配列が重要であることをみいだしたが、それ以外にも共同して作用するエレメントが存在することが明らかになってきた。現在、これらのエレメントに結合する転写因子の同定とクローニングを進めている。今後はCCR4の発現に関与することが明らかになった転写因子について、それらのATL発がんにおける役割を強制発現系やsiRNAによるノックダウン実験によって明らかにする。さらに、ATL細胞でのこれらの転写因子の構成的な発現および機能亢進のメカニズムを分子レベルで明らかにする。それによっていまだ不明なところの多い遺伝子レベルでのATLの発がん機構に関して新たな知見をもたらす。

我们发现趋化因子受体 CCR4 在 ATL 中经常呈强阳性，并且 CCR4 表达解释了 ATL 的频繁皮肤浸润，并表明 ATL 的起源是 Th2 或调节性 T 细胞（Blood，2002）。 CCR4在ATL中如此高频率、高水平的表达可能与ATL在转录水平上的致癌机制密切相关。因此，在本研究中，我们将阐明ATL中CCR4表达所涉及的转录因子，并检查它们在ATL癌发生中的参与。首先，我们通过5'-RACE定位了ATL细胞中CCR4的转录起始位点。结果，ATL细胞中CCR4转录在外显子1上游和第一个内含子内的两个区域启动，分别称为第一启动子和第二启动子。因此，将1-kb的第一启动子和2-kb的第二启动子克隆到荧光素酶报告质粒中，并进行报告测定。结果，这些启动子在ATL细胞中表现出很强的转录活性。因此，我们从 5' 侧去除了每个启动子区域，并重复报告基因测定以缩小表达所需的区域范围。然后，将点突变连续引入到这些必要区域中存在的候选元件中，并鉴定必要元件。尽管我们发现参与 Th2 分化的 GATA-3 识别序列对于第一和第二启动子都很重要，但很明显还有其他元件一起作用。我们目前正在鉴定和克隆与这些元件结合的转录因子。今后，我们将通过强制表达系统和使用siRNA的敲低实验来阐明已被证明参与CCR4表达的转录因子在ATL致癌过程中的作用。此外，我们将在分子水平上阐明ATL细胞中这些转录因子的组成型表达和高活性的机制。这将为人们在基因水平上了解ATL的致癌机制提供新的认识，而这一机制目前尚不清楚。