腸管病原性大腸菌の感染初期過程における腸上皮バリア破壊メカニズムの解析

致病性大肠杆菌感染早期肠上皮屏障破坏机制分析

基本信息

批准号：
16017255
负责人：
三宅眞実
金额：
$ 4.86万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、腸管病原性大腸菌(EPEC)が引き起こす腸上皮バリア破壊をEPEC下痢症に繋がる重要な病理変化と捉え、そのメカニズムを解析することで、EPEC下痢発症メカニズム解明を試みた。バリア破壊に関与するEPEC因子として、菌体表層蛋白intiminと、3型分泌装置により分泌されるエフェクター分子Tirを同定した。両者は菌が宿主細胞に密着する際に重要な働きをする。得られた結果は、菌が宿主細胞と密着する条件下でのみ分泌されるバリア破壊因子があることを示唆していた。[^<35>S]アミノ酸を用いたパルス標識実験で、Tir-intimin結合依存性に分泌される蛋白を見いだし、その分子量(約25kDa)からMapと呼ばれるエフェクターがバリア破壊因子である可能性を疑った。そこでMap欠損株を作製したところ、そのバリア破壊能は大きく低下していた。Mapは宿主細胞質内に分泌されると、ミトコンドリアに集積することが知られている。MapのN末端アミノ酸配列を調べるとミトコンドリア移行シグナルを見いだしたため、ミトコンドリア移行に重要と思われる疎水性アミノ酸1個を電荷を持つアミノ酸に置換した。この変異Mapはミトコンドリア移行性を失っており、同時にバリア破壊活性も消失していた。すなわち、Mapがバリア破壊を引き起こすには、一旦ミトコンドリアに移行することが必要と考えられた。しかしながら、Mapの分泌量は、EPECが宿主と密着することとは無関係で、上記分子量約25kDaの蛋白はMapではない可能性が考えられた。総合的に考えた結果、宿主依存性にEPECが分泌するバリア破壊因子が他にもあると考え、宿主依存性に分泌されるエフェクターを網羅的に同定する実験系を構築、スクリーニングを実施したところ、1個の陽性クローンが得られた。そのDNA配列はこれまでエフェクターとして報告されていないタンパクのもので、新規エフェクターである可能性が示唆された。

在这项研究中，由肠道疾病大肠杆菌（EPEC）引起的肠上皮屏障破坏被认为是导致EPEC腹泻的重要病理变化，并且试图阐明EPEC腹泻的机制来阐明该机制。鉴定为鉴定为细菌表面蛋白内膜蛋白和由三重分泌物分泌的效应分子的EPEC因子被鉴定为细菌表面蛋白内膜蛋白。当细菌粘附在宿主细胞上时，两者都很重要。获得的结果表明，仅在细菌粘附在宿主细胞的条件下才有屏障破坏因子分泌。 [^<35> s]在使用氨基酸的脉冲符号实验中，发现了由TIR- iintimin键入依赖性分泌的蛋白质，并且分子量（约25KDA）可能具有称为映射的效应器是屏障破坏的可能性我怀疑。因此，当产生地图缺乏应变时，屏障的破坏力显着下降。众所周知，当地图在细胞之王中分泌时在线粒体中分泌。在检查地图的N末端氨基酸序列时，我们发现了线粒体迁移信号，因此，一种被认为对线粒体迁移很重要的疏水氨基酸被带电荷取代。突变图失去了线粒体迁移，同时，屏障破坏活动也消失了。换句话说，有必要曾经搬到线粒体，以引起地图造成障碍破坏。然而，地图分泌的量与宿主的EPEC粘附无关，并且可能没有MAP的分子量约25 kDa的蛋白质。由于全面思考，我们认为EPEC在宿主依赖中分泌的其他障碍因素，并且我们已经建立并筛选了一个实验系统，该系统全面识别了宿主依赖性的效应器。。 DNA序列是一种蛋白质，以前尚未报告为效应子，提示新的效应子。

项目成果

期刊论文数量（8）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Role of C-terminal regions of the C-terminal fragment of Clostridium perfringens enterotoxin in its interaction with claudin-4.

DOI：
10.1016/j.jconrel.2005.07.008
发表时间：
2005-11
期刊：
Journal of controlled release : official journal of the Controlled Release Society
影响因子：
0
作者：
A. Takahashi;M. Kondoh;A. Masuyama;M. Fujii;H. Mizuguchi;Y. Horiguchi;Yoshiteru Watanabe
通讯作者：
A. Takahashi;M. Kondoh;A. Masuyama;M. Fujii;H. Mizuguchi;Y. Horiguchi;Yoshiteru Watanabe

Role of N-terminal amino acids in the absorption-enhancing effects of the C-terminal fragment of Clostridium perfringens enterotosin.

N 端氨基酸在产气荚膜梭菌肠毒素 C 端片段吸收增强作用中的作用。

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
J.Pharmacol. Exp. Ther. 314
影响因子：
0
作者：
Masuyama;A.;et al.
通讯作者：
et al.

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通讯作者：
成谷宏文，玉井栄治，桑原知巳