細胞周期調節に関与するRNA結合蛋白質の解析

参与细胞周期调节的 RNA 结合蛋白分析

基本信息

批准号：
14033253
负责人：
松本健
金额：
$ 3.07万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

Xenopus cold-inducible RNA-binding protein2(xCIRP2)はアフリカツメガエルの卵母細胞に存在する主要なRNA結合蛋白質の一つである。ホモログの解析から、発生の正常な進行に重要であることが示唆されているが、その分子機能は明らかにされていなかった。マウスCIRPは高発現により細胞にG1期遅延を引き起こすことが知られている。我々は酵母two-hybrid screeningにより、xCIRP2と相互作用する蛋白質としてELAV(embryonic lethal abnormal vision)familyのRNA結合蛋白質elrAをみいだした。elrAのヒトホモログであるHuRはサイトカイン等のmRNAの3'UTRに存在するAU-rich element(ARE)に特異的に結合する蛋白質であり、mRNAの安定化に関与していることが知られている。そこで我々はHeLa細胞の抽出液を用いたin vitro RNA degradation assayにより、mRNAの安定性制御におけるxCIRP2の効果を検討した。その結果、xCIRP2がAREをもつmRNAのpoly(A)鎖分解を抑制することを新たに見いだした。また卵母細胞内でxCIRP2と結合しているmRNAを検索し、いくつかのmRNAを同定した。これらには中心体に存在する蛋白質リン酸化酵素Nek2Bや、サイクリンB1のmRNAが含まれていた。Nek2B mRNAについては、in vitro RNA degradation assayにおいてAREをもつmRNAと同様に、xCIRP2によってpoly(A)鎖分解が抑制されることがわかった。これらの結果から、xCIRP2はpoly(A)鎖長を制御することで、特異的なmRNAの翻訳もしくは安定性を制御している可能性が示された。

非洲爪蟾冷诱导 RNA 结合蛋白 2 (xCIRP2) 是非洲爪蟾卵母细胞中存在的主要 RNA 结合蛋白之一。对其同源物的分析表明它对于正常发育进程很重要，但其分子功能尚未阐明。已知小鼠 CIRP 由于高表达而导致细胞 G1 期延迟。通过酵母双杂交筛选，我们发现ELAV（胚胎致死视觉异常）家族的RNA结合蛋白elrA是与xCIRP2相互作用的蛋白质。 HuR 是 elrA 的人类同源物，是一种与细胞因子等 mRNA 3'UTR 中富含 AU 的元件 (ARE) 特异性结合的蛋白质，已知参与 mRNA 的稳定。因此，我们使用 HeLa 细胞提取物通过体外 RNA 降解研究了 xCIRP2 对调节 mRNA 稳定性测定的影响。结果，我们新发现 xCIRP2 抑制含有 ARE 的 mRNA 的聚腺苷酸链降解。我们还在卵母细胞中寻找与 xCIRP2 结合的 mRNA，并鉴定了几种 mRNA。其中包括中心体蛋白激酶 Nek2B 和细胞周期蛋白 B1 的 mRNA。关于 Nek2B mRNA，体外 RNA 降解测定表明，xCIRP2 抑制了 Poly(A) 链降解，与 ARE 的 mRNA 类似。这些结果表明xCIRP2可以通过控制poly(A)链长度来控制特定mRNA的翻译或稳定性。