がん細胞の浸潤・転移およびがん化におけるRho-mDia系の機能解析

Rho-mDia系统在癌细胞侵袭、转移和癌变中的功能分析

• 批准号: 14028065
• 负责人: 富永 知子
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Foundation for Advancement of International Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14028065/
• 关键词: がん; 細胞・組織; シグナル伝達

低分子量G蛋白質Rhoの下流に位置する情報伝達系の細胞接着・運動への作用機構について解析を進めてきた。Rhoの標的蛋白質ROCKとは明らかに機能を異にするmDiaを中心にした研究により、新たな情報伝達経路であるRho-mDia-Srcキナーゼ系、新規mDia結合蛋白質DIPの発見に続き、本年度、mDiaが核内移行し、転写因子Pax6と結合してその転写抑制をすること、mDiaが神経細胞(小脳顆粒細胞の初代培養系およびNIE-115細胞株)の軸索伸展に関してはROCKと相反する効果を示すことを発表した。このことは、Rhoの下流における時・空間的制御機構の存在により、細胞運動が巧妙に制御されていることを示唆する。これに引きひき続き、DIPとSrcキナーゼの関係の検討をすすめ、DIPがvSrc依存的な細胞の形質転換能に影響すること、DIPがある刺激下でSrcキナーゼ依存的にリン酸化され、その際Rhoファミリー蛋白質の調節因子である二つの蛋白質がDIPと結合して活性化されることを見いだした。また、DIPのリン酸化部位および結合蛋白質との結合部位を同定し、DIPのdominant negative(DN)体および非リン酸化体のpoint mutantを作製した。Invasion assay, Time-lapseを用いた細胞の運動能を検討し、DIPおよびそのリン酸化それによって引き起こされる結合蛋白質の活性化が、細胞運動に重要で、DIPのDNおよびmutantでは細胞運動能が低下し、かつ細胞形態に変化が起きることを確認した(論文投稿中)。今回見いだした、Rho-mDia-Src-DIP-Rhoファミリー蛋白質の調節因子の経路は、Rhoファミリー蛋白質間の巧妙な調節機構を明らかにしたもので、この経路をもとに、がん細胞を用いてその浸潤・転移への影響を検討したい。

我们一直在分析位于低分子量G蛋白Rho下游的信息转导系统对细胞粘附和运动的作用机制。以 mDia 为中心的研究发现了一种新的信息转导途径，即 Rho-mDia-Src 激酶系统，以及一种新型 mDia 结合蛋白 DIP，mDia 的功能与 Rho 靶蛋白 ROCK 明显不同。与ROCK相矛盾的是，a易位到细胞核中并与转录因子Pax6结合以抑制其转录，并且mDia参与神经元的轴突延伸（小脑颗粒细胞和NIE-115细胞系的原代培养系统）。它是有效的。这表明细胞运动受到 Rho 下游时空控制机制的精确控制。随后，我们继续研究DIP和Src激酶之间的关系，发现DIP影响vSrc依赖的细胞转化能力，并且DIP在一定刺激下以Src激酶依赖的方式磷酸化，并且我们发现两种蛋白Rho 家族蛋白的调节因子通过与 DIP 结合而被激活。我们还鉴定了 DIP 的磷酸化位点和与结合蛋白的结合位点，并创建了 DIP 的显性失活（DN）和非磷酸化点突变体。我们使用侵袭测定和延时检测了细胞运动，发现DIP及其磷酸化诱导的结合蛋白的激活对于细胞运动很重要，并且DIP DN和突变体降低了细胞运动，也证实了细胞形态的变化。发生（目前正在提交论文）。此次发现的Rho-mDia-Src-DIP-Rho家族蛋白调节因子通路揭示了Rho家族蛋白之间复杂的调节机制，基于该通路，癌细胞可用于研究其对侵袭和侵袭的影响。转移。

项目成果

Satoh, S., Tominaga, T.: "Mouse Diaphanous Interacting Protein acts downstream Rho-mDia and modifies Src activation and stress Fiber Formation"J.Biol.Chem.. 276. 39290-39294 (2001)

Satoh, S., Tominaga, T.：“小鼠透明相互作用蛋白作用于 Rho-mDia 下游并改变 Src 激活和应力纤维形成”J.Biol.Chem.. 276. 39290-39294 (2001)

富永知子(分担執筆): "細胞骨格と細胞運動(竹縄忠臣編)(II.ダイナミックなアクチン繊維の再編を制御するシグナル分子4.mDia)"Springer-Verlag Tokyo, Inc.. 123-137 (2002)

Tomoko Tominaga（撰稿人）：“细胞骨架和细胞运动（编辑 Tadaomi Takenawa）（II. 控制动态肌动蛋白纤维重组的信号分子 4.mDia）” Springer-Verlag Tokyo, Inc.. 123-137 (2002)

Tominaga, T., Meng, W., Togash, K., Urano, H., Alberts AS., Tbminaga, M.: "The Rho GTPase effector protein, mDia, inhibits the DNA-binding ability of the transcription factor Pax6 and changes the pattern of neurite extension in cerebellar granule cells th

Tominaga, T.、Meng, W.、Togash, K.、Urano, H.、Alberts AS.、Tbminaga, M.：“Rho GTPase 效应蛋白 mDia 抑制转录因子 Pax6 的 DNA 结合能力，并且

Numazaki, M., Tominaga, T., Toyooka, H., Tominaga, M.: "Direct Phosphorylation of Capsaicin Receptor VR1 by PKC and Identification of Two Target Serine Residues"J.Biol.Chem.. 277. 13375-13378 (2002)

Numazaki, M.、Tominaga, T.、Toyooka, H.、Tominaga, M.：“通过 PKC 直接磷酸化辣椒素受体 VR1 并鉴定两个目标丝氨酸残基”J.Biol.Chem.. 277. 13375-13378（

Tominaga, T., Meng, W., Togash, K., Urano, H., Tominaga, M.: "Ca^<2+>-dependent Physical Interaction with Calmodulin Causes Desensitization of TRPV1(VR1)"Proc.Natl.Acad.Sci.USA. (in press). (2003)

Tominaga, T.、Meng, W.、Togash, K.、Urano, H.、Tominaga, M.：“Ca^<2> 与钙调蛋白依赖性物理相互作用导致 TRPV1 (VR1) 脱敏”Proc.Natl.Acad