天然より得られた抗腫瘍物質の作用機序解析と実験病態モデルでの評価

天然来源的抗肿瘤物质的机制分析和实验疾病模型的评估

基本信息

批准号：
13218140
负责人：
小宮山寛機
金额：
$ 22.4万
依托单位：
Kitasato Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

がん細胞の特性を利用して探索系を工夫し、天然から薬剤耐性克服物質、IL-6阻害物質、TRAIL活性増強物質を探索し、単離した活性物質を評価すると共に、すでに発見された物質の誘導体を合成しそれらの活性を評価した。1.耐性克服物質:KB/VJ300,P388/VCRを用いて探索し、糸状菌FO-7711株よりCD4、CD6を、またAgaricus blazeiよりステロイド骨格を持ったAgariblazeisirols A、Bを単離した。カビ由来pyripyropen誘導体の7-0-BenzoylpyripyropeneAはP-gpおよびMRPに結合してそれらの働きを抑制した。マレーシアの植物から18種のAspidofractinine型のインドールアルカロイドを単離した。特に、Tabernaemontana属より得たconodusarineとconodiparine AはP388細胞に対しin vivoで耐性克服作用を示した(T/C=50%)。合成したイソプレノイド化合物43種のなかで、N-5228はin vivoでP-388細胞に対して耐性克服作用を示した(T/C=40%)。C330,C264およびN-5228はP-gpに結合してその活性を阻害することを認めた。2.IL-6活性阻害物質:生薬のセンソから単離した20,21S-epoxy-resibufogenin-formate(ERBF)のアセチル化体(ERBA)に顕著なIL-6依存性増殖MH-60細胞の増殖阻害を認めた。ERBAはIL-6受容体に結合してIL-6を阻害する競合的拮抗であった。放線菌由来IL-6活性阻害物質Madindoline Aはgp-130に結合してIL-6の活性を阻害する特異的な作用を示す。この構造活性相関を調べたところ活性にはfuloindoline骨格に結合しているS配位の水酸基、メチレン基でR配位結合したdiketocyclopenteneの存在が必須であることが示された。誘導体C-18化合物はMadindolineAより強いIL-6阻害活性を示し、colon26誘発癌性悪液質マウスモデルにおいても顕著な悪液質改善作用が認められた。3.TRAIL増強物質の探索:ヒトT成人白血病細胞を用いてタイ産のBlumeabasamiferaよりmethyldihydroquercetin(MDQ)を単離した。アポトーシス誘導はAnnexin/PI染色にて確認した。本物質を添加するとPro-caspase-8の減少、caspase-9および-3のcleavageの増強が認められた。MDQとTRAILの併用はミトコンドリアの膜電位を低下させた。一方、BCL-2, BCL-xL, XIAP, c-IAP, survivine, Bak, Baxに変化はなかった。デスレセプターであるTRAIL-R2の発現がほぼ倍増していることがわかった。この事からアポトーシス増強のメカニズムはMDQによるデスレセプター発現増強によると思われる。

利用癌细胞的特征，探索系统的设计，探索耐药性，IL-6抑制剂，跟踪活性增加了物质，评估了孤立的活性物质，并且已经发现了该物质的衍生物。。 1。克服抗性：使用KB/VJ300，P388/VCR，探索FO-7711细菌的CD4和CD6，以及分离的Agariblazeisirols A，B，具有来自agaricus blazei的类固醇。霉菌衍生的吡吡宁衍生物7-0-苯甲酰二吡中治培养基与P-gp和MRP结合以抑制这些功能。马来西亚植物从18种冬丁胺型吲哚生物碱中分离出来。尤其是，从披体山塔纳（tabernaemontana）获得的脊髓灰质和脊髓林A显示了克服对p388细胞的抗性的作用（T/C = 50％）。在43种类型的类异型化合物中，N-5228在体内表现出了p-388细胞的作用（T/C = 40％）。 C330，C264和N-5228承认与P-gp结合以抑制其活性。 2. IL-6激活抑制剂：20,21s-蛋白酶蛋白蛋白（ERBF），从粗糙的药物感官中分离出来，显着的IL-6依赖性生长MH-60细胞生长。 ERBA是一种竞争性拮抗剂，与IL-6受体结合以抑制IL-6。 IL-6活性抑制剂madindoline A是与GP-130结合并抑制IL-6活性的特异性作用。根据这种结构活性的相关性，活性表明，在亚甲基下结合r的二酮cy烯的存在对于活性的活性至关重要。衍生物C-18化合物的IL-6抑制活性比Madindolinea具有更强的IL-6抑制活性，并且在Colon26诱导的癌性弹性小鼠模型中也得到了认可。 3。探索步道增强物质：使用成人白血病细胞与甲基二氢Quercetin（MDQ）分离。 Annexin/pi染色证实了凋亡指南。当添加该物质时，降低了蛋白酶-8，并观察到caspase-9和-3的裂解增加。 MDQ和TRAIL的组合降低了线粒体的膜电位。另一方面，Bcl-2，Bcl-XL，XIAP，C-IAP，Survivine，Bak，Bax没有改变。事实证明，死亡受体Trail-R2的表达几乎翻了一番。由此，凋亡增强的机制似乎是由于MDQ的Desel受体表达增加所致。